环氧合酶2对脓毒症大鼠免疫功能的影响

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1、环氧合酶2对脓毒症大鼠免疫功能的影响作者：李斌李玉民石斌李汛周文策朱晓亮何明彦【摘要】目的研究环氧合酶2（cyclooxygenase-2，COX-2）在脓毒症大鼠肝组织炎症反应中的表达及其对免疫功能的影响。方法选择质量相近的VcDNA第一链合成试剂盒为上海生工生物工程技术服务有限公司产品；2×HotStartTaqPCRMastermix试剂盒为北京天为时代公司产品；荧光标记的大鼠CD4和CD8抗体购自江苏联科生物技术有限公司。　　1.4检测指标和方法各组手术后3、6、12和24h抽取大鼠门静脉血标本，用流式细胞仪检测CD4+、CD8+，ELISA法检测IL

2、-6、IL-10、TNF-α；取肝组织观察病理学改变和进行RT-PCR检测。　　1.5统计学分析所得实验数据均用SPSS13.0软件分析。数据满足方差齐性时，采用x±s描述，多组比较采用单因素方差分析方法，组间比较采用Bonfferoni法；数据不满足方差齐性时，采用中位数描述，多组比较采用Kraskal-Wallis秩和检验方法，组间两两比较采用调整检验水准后的Wilcoxon秩和检验方法。P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1大体及电镜观察结果（1）假手术组：肝脏无明显改变，红润，无血性腹水及坏死灶（图1）。（2）脓毒症组：可见不同程度

3、的血性腹水，肠管扩张，并可见散布于盲肠、大网膜、肠系膜等处出血、坏死灶和皂化斑。肝脏大小无明显改变，颜色呈暗红色，表面可见散在的点状淤血。电镜下3h可见肝细胞核基本正常，Diss间隙增宽，溶酶体增多，线粒体扩张（图2a）。6h可见肝细胞核固缩、畸形，内质网减少，线粒体嵴断裂、髓鞘样改变，并有肥大细胞、巨噬细胞和浆细胞浸润（图2b）。12、24h可见细胞变形，血窦扩张，肝细胞核固缩、染色质呈块状、核膜不清，线粒体、内质网明显减少，内质网扩张、脱颗粒，胆小管闭塞、绒毛消失（图2c）。（3）NS-398干预组：除3h外，其余各时间点可见少量血性腹水，肠管轻度扩张，盲

4、肠处可见出血、坏死，无皂化斑。肝脏色泽稍暗，未见出血点。电镜下3h与脓毒症组3h变化基本相同。6hDiss间隙增宽，核染色质边集，内质网减少，线粒体扩张，未见细胞浸润（图3a）。12、24h可见溶酶体增多，内质网和线粒体仅见个别扩张，个别核膜不完整、染色质边集（图3b）。　　2.2RT-PCR观察COX-2mRNA在各组不同时间变化结果肝组织中COX-2mRNA在假手术组呈低表达（1040.82±2.77）；脓毒症组3h表达明显增强（2064.04±6.78），到6h达到高峰（3992.45±16.75），12、24h仍呈高表达（2916.80±6.79，22

5、37.80±7.42）；NS-398干预组COX-2mRNA表达较脓毒症组显著降低，但是仍高于假手术组。见图4。　　2.3不同时间IL-6、IL-10、TNF-α含量比较脓毒症组IL-6、IL-10在3h即明显增高，24h达到高峰，各时段与假手术组比较差异有统计学意义（P<0.05）；而TNF-α在术后早期即达到一个较高水平，24h内变化不大。在NS-398干预组，IL-6虽有所增高，但各时段明显低于脓毒症组，12、24h差异有统计学意义（P<0.05）；IL-10在各时段增高更明显，与脓毒症组比较差异有统计学意义（P<0.05）；TNF-α

6、变化与脓毒症组相比虽有降低趋势，但是差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。表1不同时间IL-6、IL-10和TNF-α在各组的变化（略）　　2.4不同时间CD4+/CD8+比值变化脓毒症组3hCD4+/CD8+比值明显下降，与假手术组比较差异无统计学意义；6h后进一步降低，24h达最低。NS-398干预组在3h可见上升，之后逐渐下降，24h也降到最低，但是相同时间仍高于脓毒症组（P<0.05）。见表2。表2不同时间CD4+/CD8+比值在各组的变化（略）　　3讨论脓毒症的发病机制相当复杂。它与炎症反应、凝血功能紊乱、神经及内分泌调节、免疫功能紊

7、乱有关。研究认为，病理损害打击下的机体反应可同时出现特异性免疫系统抑制和非特异性炎症反应亢进，导致免疫平衡失控。无论是免疫亢进还是免疫抑制都对宿主不利，而恢复宿主内环境稳定，特别是恢复免疫机能稳定可能是解决脓毒症的方法［5-6］。本实验采用与临床感染性腹膜炎最为接近的典型CLP制造脓毒症动物模型，结果显示脓毒症之后3h肝脏即有明显病理变化，到24h时病理损伤最严重。这提示脓毒症之后肝组织炎症反应剧烈，已造成一定程度的肝损伤。在脓毒症组3h，CD4+/CD8+比值开始下降，24h达到最低（0.21±0.05）；与此同时，血清中IL-6、IL-10和TNF-α增高

8、，与假手术组比较差异有统计学意义（P&