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《退变腰椎间盘组织细胞凋亡及相关基因fas和bcl-2蛋白的表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、退变腰椎间盘组织细胞凋亡及相关基因Fas和Bcl?2蛋白的表达【摘要】目的观察髓核组织Fas和Bcl?2蛋白的表达,探讨其在腰椎间盘退变过程可能发挥的作用。方法采用原位DNA片断末端标记(TUNEL)和免疫组织化学方法,检测20例退变腰椎间盘(退变组)及6例正常腰椎间盘(对照组)髓核组织的细胞凋亡状态及凋亡相关基因Fas和Bcl?2的表达。结果退变组及对照组髓核组织细胞凋亡指数(AI)分别为(50.23±13.36)和(28.32±6.67)(P<0.05),Fas蛋白阳性细胞百分比(74.26±10.15)%和(
2、41.72±4.62)%(P<0.01),Bcl?2蛋白阳性细胞百分比(55.37±13.65)%和(27.17±5.17)(P<0.01)。凋亡细胞越多,Fas和Bcl?2的表达越强。结论Fas和Bcl?2蛋白均参与腰椎间盘组织中细胞凋亡的调节,可能在腰椎间盘退变中发挥重要作用。【关键词】椎间盘腰椎细胞凋亡1991年,Tompson用细胞培养方法观察细胞因子对椎间盘细胞增殖和细胞外基质更新的影响[1],国内外学者现已认识到细胞因子在腰椎间盘髓核细胞凋亡过程中起着重要的作用。有关细胞凋亡及凋亡相关基因在退变性
3、疾病的发生及进展中所起作用越来越受到重视[2]。多种细胞因子可直接或间接影响髓核细胞的凋亡,如高水平NO可以促进髓核细胞凋亡,转化生长因子?β1可以抑制髓核细胞凋亡等[2?3]。笔者观察退变腰椎间盘组织细胞凋亡状态及凋亡相关基因Fas、Bcl?2的表达情况,探讨其在腰椎间盘退变过程的作用。1材料与方法1.1标本(1)退变组:退变腰椎间盘组织(L3～5)取自2003年12月～2004年12月住院手术的腰椎间盘突出症患者的髓核标本,共20例,男性13例,女性7例,年龄(45.20±15.72)岁(21～69岁)。纳入标准:有
4、典型临床症状、体征及相应MRI表现,术后病理证实椎间盘组织明显退变。(2)对照组:正常腰椎间盘组织(L3～5)取自同期本院骨科脊柱创伤需手术治疗的患者(术前均签订取材知情同意书),共6例,男性3例,女性3例,年龄(32.50±14.36)岁(24～56岁)。纳入标准:伤前无慢性腰背痛史,MRI无示椎间盘退变征象,术后组织学检查椎间盘组织无明显退变。1.2方法1.2.1原位DNA片断末端标记采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的原位缺口末端标记法(TUNEL法),细胞核呈蓝黑色者为阳性细胞,即凋亡细胞。每例计数10个40
5、0倍视野,以平均100个细胞中含凋亡细胞个数为凋亡指数(AI)。1.2.2免疫组织化学使用S?P免疫组织化学试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司),一抗为兔抗人Fas单克隆抗体和鼠抗人Bcl?2单克隆抗体。所有标本均在同一条件下采用链霉蛋白素?生物素法[LSAB(SP)法]进行免疫组织化学染色,各步骤间均用PBS洗片。阳性对照选用经病理检查确诊为淋巴瘤的病理石蜡切片,用PBS代替一抗为阴性对照。细胞质出现棕黄色颗粒为染色阳性细胞,每例切片用400倍镜双盲法计数,细胞数不少于400个,并计算细胞阳性率(%)。1.3统计学处
6、理资料以x±s表示。采用Student?t检验和多重线性回归分析。2结果2.1腰椎间盘髓核组织中,Fas、Bcl?2蛋白表达在软骨细胞,其细胞膜及细胞质出现棕黄色颗粒状染色(图1)。腰椎间盘髓核组织中,凋亡细胞为软骨细胞,其细胞核呈蓝黑色。对照组与退变组腰椎间盘髓核组织中细胞AI、Fas与Bcl?2蛋白表达见表1。2.2运用多重线性回归分析髓核细胞表达的Fas、Bcl?2蛋白与髓核细胞AI的关系,获得一多元线性回归方程:Y＝0.671X1－0.124X2＋6.419Y:髓核细胞凋亡指数(AI);X1、X2:髓核组织中细胞
7、表达Fas,Bcl?2蛋白的阳性率.表1对照组与退变组腰椎间盘髓核组织中髓核细胞凋亡指数及Fas、Bcl?2蛋白表达程中各系数均不为零,回归方程有意义。又由于该方程相关系数的平方值为0.418,表示这两个自变量一起,可以解释因变量41.8％变异性。3讨论腰椎间盘长期受各种应力作用劳损较重,在压力、张力、扭转、震荡等反复作用下,椎间盘内压力增加,水分丢失,氧张力下降,细胞活力下降甚至死亡,基质成分如蛋白多糖、硫酸软骨素等减少,这些均促成腰椎间盘退变[5]。腰椎间盘退行性变是导致腰椎间盘突出症的基本病因,退变腰椎间盘主要病理
8、改变为椎间盘细胞量减少及椎间盘基质的降解[6]。既往的研究表明,椎间盘中多种生长因子类保护性细胞因子生成及分泌的减少以及多种炎性损伤性细胞因子的增多,是造成髓核细胞直接或间接大量凋亡的重要原因,并最终导致椎间盘退变甚或椎间盘突出。其中,Fas分子对髓核细胞的促凋亡作用已获得共识,但对于Bcl?2分子的作用却有不同观点
