益气养阴方对小鼠肝癌血道转移的影响

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1、益气养阴方对小鼠肝癌血道转移的影响　　经血道转移是大多数恶性肿瘤转移的重要途径之一。临床上中医药在改善肿瘤患者生存质量，延长带瘤患者生存时间以及减少远处转移灶发生等方面具有独特的优势，已成为肿瘤的手术、放疗、化疗、生物疗法之外的另一重要治疗大法，探索中医药在防治肿瘤转移的作用受到越来越广泛的重视。益气养阴方在临床抗肿瘤转移治疗中多有应用，但动物实验对于益气养阴方的抗肿瘤转移研究目前尚无报道。为了进一步了解益气养阴方抗肿瘤转移的疗效及作用机理，本实验根据以往对益气养阴方的抗肿瘤转移的筛选工作结果，通过其对腹水型H22肝癌小鼠血道转移的抑制作用进行了观察研究。现报

2、道如下。　　1材料　　1.1瘤株及动物小鼠腹水型H22肝癌瘤株，由山东省医学科学院药物所肿瘤室提供。昆明种小鼠30只，体质量(20±2)g，雌性，SPF级，由山东中医药大学实验动物中心提供（动物合格证号：SCXK鲁20030004）。　　1.2药品益气养阴方中药由建联中药店提供，经山东中医药大学中药专家鉴定质量符合实验要求。注射用环磷酰胺（cytoxan，CTX），规格：200mg/支，批号：031002，上海华联制药有限公司产品。　　2方法　　2.1转移模型的建立选取接种7d的腹水瘤小鼠6只，各抽吸腹水1ml，放入无菌容器中混匀。D-Hanks液洗涤3次，台

3、盼蓝染色，计数肿瘤细胞存活率＞95％。参考文献［1］调整细胞浓度为5×106cell·ml-1，每只小鼠尾静脉注射细胞悬液0.2ml。　　2.2分组与给药实验小鼠随机分为3组，每组各10只，分别为：模型对照组（简称造模组）、益气养阴方组（简称中药组）、环磷酰胺对照组（简称西药组）。造模组小鼠每天灌胃生理盐水0.1ml/10g；常规方法制备益气养阴方水煎液，浓缩至相当于原生药材4.3g/ml药液，冷却装入灭菌药瓶，置4℃冰箱备用。按人鼠等效剂量换算给药，中药组小鼠分别每天灌胃中药水煎液0.1ml/10g。西药组给予临床常用化疗药物环磷酰胺腹腔注射60mg/kg，

4、隔日1次。自造模之日起，连续给药14d。脱颈椎处死小鼠，剥离肺脏，置于Bouin固定液，常规石蜡切片HE染色。　　2.3观察指标　　2.3.1体重变化称体质量，比较实验前后体质量变化情况。　　2.3.2免疫器官的影响取脾脏和胸腺称重，计算脾指数及胸腺指数。　　2.3.3肺转移瘤生长情况剥离肺脏称重，Bouin液固定24h观察，以单盲法计数肺转移瘤结节数，计算肺结节抑制率、肺转移瘤生长指数和肺转移瘤生长抑制率，光镜下观察瘤组织生长情况。　　2.4统计学方法计量资料用±s表示，用单因素方差分析(one-wayANOVA)进行比较，等级资料比较用Kruskal-Wa

5、llis秩和检验，用SPSS14.0软件进行统计分析，以P＜0.05作为差异有显著性检验水准。　　3结果　　3.1体质量变化实验后造模组和中药组体质量有所增长，西药组体质量明显减轻；与造模组比西药组体质量减轻显著，P＜0.01；中药组与西药组比体质量增加有显著性差异（P＜0.01）。结果见表1。表1益气养阴方对肝癌血道转移小鼠体质量影响的比较（略）　　3.2免疫器官的影响中药组脾重量、胸腺重量及指数较造模组明显升高，P＜0.05；西药组脾重量较造模组显著降低，P＜0.05；中药组脾和胸腺重量及脾指数较西药组明显增加（P＜0.01或P＜0.05）。结果见表2。表

6、2益气养阴方对肝癌血道转移小鼠免疫器官影响的比较（略）　　3.3肺转移瘤生长情况药物组的肺重量、肺瘤结节数和肺转移瘤生长指数较造模组均有下降，中药组肺瘤结节数与造模组比减少有显著性差异，P＜0.05；西药组肺重量和肺瘤结节数较造模组减少显著性差异，P＜0.05；中药组与西药组肺转移情况比无显著性差异（P＞0.05）。结果见表3。表3益气养阴方对肝癌血道转移小鼠肺转移瘤生长影响的比较（略）　　3.4肺转移瘤的形态学观察肺转移瘤组织学检查类型为转移性H22肝癌瘤灶，肺转移瘤形态学表现为：造模组肺组织可见广泛的转移灶，结节大小不一，多分布于肺边缘、小血管周围或支气管

7、周围，转移结节包绕各级气管，部分结节围绕血管生长呈“袖口状”，少数侵袭血管壁，甚至整个肺叶被瘤组织取代。中药组肺组织可见转移结节明显减少，以小转移灶为主，边界清楚，围绕血管生长或侵袭血管壁的现象较少，可见较多正常肺组织。西药组肺组织转移结节数量较造模组减少，大小不等，少数结节较大，多数结节边界清楚，也有围绕气管和血管生长并侵袭血管壁的现象。此结果与小鼠肺表面转移瘤结节数的结果相吻合。镜下观察肺转移程度结果显示：中药组与西药组肺转移程度均较造模组下降。造模组肺转移程度多为Ⅲ级，没有Ⅰ级的出现；中药组各级转移均有出现，但多集中为Ⅱ级；西药组多以Ⅱ级和Ⅲ级转移为主（

8、肺内转移瘤转移程度分级方法参考文献［2