hplc法测定腰痛片中芍药苷含量论文

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1、HPLC法测定腰痛片中芍药苷含量论文【摘要】目的建立腰痛片中芍药苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，ShimpackVP-ODSC18(4.6mm×150mm,.freel）为色谱柱，甲醇-0.05%磷酸（体积比40∶65）为流动相，检测波长为230nm，流速为1.0ml/min。结果芍药苷线性范围为0.1448～2.8960μg，平均回收率为100.4％，RSD为1.53％（n＝6）。结论该方法操作简便，结果准确.freelpackVP-ODSC18(4.6mm×150mm,5μm)。腰痛片（桂林三金药业股份有限公司，基片重0.35g）；芍药苷对照品（

2、供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供，批号为110736-200423）；甲醇、磷酸均为色谱纯（天津四友）；水为去离子纯化水；其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：ShimpackVP-ODSC18(4.6mm×150mm,5μm）；以甲醇-0.05%磷酸（体积比40∶65）为流动相；流速为1.0mL/min；检测波长为230nm；进样量10μL；理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。2.2对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥36h的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含60μg的溶液，即得。2.3供试品溶液的制备取本品10片，去

3、糖衣，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为50%的甲醇50mL，称定重量，超声处理（功率400in，放冷，再称定重量，用体积分数为50%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.4阴性对照品溶液的制备取处方组成中除赤芍外的其余成分，按“2.3”项处理，制成阴性对照品溶液。2.5专属性检查吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10μL注入色谱仪，测定。结果表明，阴性对照品在供试品相应的位置没有干扰。2.6线性及范围精密称取芍药苷对照品3.62mg，置5mL量瓶中，加甲醇制成0.724mg/mL的贮备液。精密吸取上述贮备液配

4、成一系列对照品溶液（0.01448、0.0362、0.0724、0.1448、0.2896mg/mL），分别精密吸取10μL注入液相色谱中，测定。以芍药苷质量（m）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，回归方程为：A＝11937m＋22.9，r＝0.9999。结果表明芍药苷进样量在0.1448～2.8960范围内线性关系良好。2.7精密度试验精密吸取对照品溶液（0.0724mg/mL）10μL，重复进样6次，芍药苷峰面积RSD为1.82%。图1对照品（A）、样品（B）、阴性（C）HPLC图谱（a为芍药苷峰）（略）Fig.1HPLCchromatogramsofcon

5、trol(A),sample(B)andnegativecontrol(C)2.8稳定性试验分别于0，1，2，3，5，12，24，48h精密吸取同一批号（批号为20070201）供试品溶液10μL，按“2.1”项下测定，结果芍药苷峰面积RSD为1.25%，表明供试品在48h内稳定。2.9重复性试验取同一批号腰痛片（批号为20070201）6份，按“2.3”项下方法制备，并按“2.1”项色谱条件测定芍药苷的含量。结果芍药苷平均含量为3.57mg/g，RSD为1.93%。2.10加样回收率试验取本品（批号为20070201，含量为3.57mg/g）约0.3g，精密

6、称定，加入芍药苷溶液（1.0190mg/mL）1mL，按“2.3”项方法制备，分别测定，计算回收率，结果见表1。2.11样品含量测定取3批腰痛片分别按“2.3”项方法制成供试品溶液，进样测定芍药苷含量，结果见表2。表1芍药苷加样回收率测定结果（n＝6）（略）Tab.1Resultsofsamplerecoverytest(n=6)表2腰痛片中芍药苷的含量测定结果（n＝3）（略）Tab.2ResultsofpaeoniflorincontentinYaotongtablets3讨论3.1在供试品溶液制备中，考虑到处方中含有药材细粉、树脂及挥发油等低极性的成分，参

7、照2005年版药典中“赤芍”的方法，采用体积分数为50%的甲醇作为提取溶媒。3.2在流动性的选择上，参照2005年版药典中“赤芍”及“白芍”项，分别以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(体积比40∶65)、甲醇-0.05moL/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇(体积比67∶173∶4∶4)为流动相进行试验。结果以甲醇-0.05%磷酸（体积比40∶65）为流动相，芍药苷峰有很好的分离度和重现性。【