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1、多指标正交优选肺宁合剂提取工艺肺宁合剂是江苏省中医院院内制剂,由麻黄、杏仁、桔梗等7味中药组成,具有止咳、祛痰、平喘作用,临床用于外感咳嗽、支气管炎等症。本试验通过正交设计,以浸膏得率、正丁醇萃取得率、甘草酸含量、麻黄碱及伪麻黄碱含量为指标,优化肺宁合剂提取工艺,为生产提供依据。 1仪器与试药 Agilent1100高效液相色谱仪,四元泵(G1311A),柱温箱(G1316A),V电子天平(Shimadzu公司)；101-1A型电热鼓风干燥箱(南通沪通制药机械厂)。 对照品麻黄碱(批号171242-200405)、伪麻黄碱(
2、批号171237-200505)均购于中国药品生物制品检定所；对照品甘草酸购于上海君创生物科技有限公司(纯度>98%)；所用中药材均购于江苏省药材公司,并经本室专家鉴定。色谱测定用水为超纯水,乙腈为色谱纯,其余化学试剂均为分析纯。 2方法与结果 2.1提取溶剂的选择通过对麻黄、甘草、桔梗等药物有效成分的分析,麻黄中的生物碱、甘草中的甘草酸及其他各味药材中作为有效成分的皂苷均为水溶性成分,因此,采用水为溶剂回流提取。 2.2正交试验方案 称取处方量药材9份,选取提取时间(A)、提取次数(B)、加水量(C)3个试验因素,
3、每个因素3个水平,按L9(34)正交表进行试验,每组平行3份。因素水平安排见表1。以浸膏得率、正丁醇萃取得率、甘草酸含量、麻黄碱、伪麻黄碱含量为指标,综合评价此提取工艺各水平优劣。表1正交试验因素水平表（略） 2.3各指标含量测定 2.3.1浸膏得率 精密量取正交试验样品9份各10mL,置蒸发皿中,水浴蒸干后置烘箱中,105℃干燥至恒重,计算得率。 2.3.2正丁醇萃取得率 预试验：取正交试验9份样品中浓度最高的一份,即1号样品20mL,考察萃取次数和每次萃取量对萃取得率的影响。结果前3次萃取得率之和占总共5次萃取得率的
4、95%,从节约的角度出发确定了正丁醇萃取3次即可。精密量取9份样品各20mL,以水饱和的正丁醇萃取3次,每次20mL,合并萃取液,置蒸发皿中水浴蒸干,恒重,计算得率。 2.3.3甘草酸含量测定 采用SupelcoODSC18(4.6mm×25cm,5μm)色谱柱,流速：1mL/min；流动相：乙腈-0.2%磷酸水(35∶65)；检测波长：250nm；进样量为10μL[1-4]。正交试验9份样品每份取相当于甘草原药材0.1g的药液,蒸馏水定容至100mL,混匀,微孔滤膜滤过,即得供试品溶液。取甘草阴性样品、甘草酸对照品、肺宁合剂
5、样品,分别按上述色谱条件进样,结果甘草酸对照品和肺宁样品在16min处出现相同峰,甘草阴性样品无干扰。可证明16min处峰即为甘草酸峰,理论塔板数为9482,分离度为5.29。 2.3.4麻黄碱、伪麻黄碱含量测定 采用色谱柱：SupelcoODSC18(4.6mm×25cm,5μL)；流动相：乙腈-0.2%磷酸(5∶95,V/V)；柱温：40℃,流速：1.0mL/min,检测波长：210nm,进样量为10μL[5-7]。 蒸馏液收集量的确定：精密吸取肺宁合剂适量(相当于麻黄原药材0.4g),置250mL烧瓶中,加水至60mL
6、,20%氢氧化钠溶液120mL,氯化钠7.5g。电热套加热,保持微沸,收集蒸馏液至预先加入0.5mol/L稀盐酸5mL的容器中,收集100mL后,改用预先加入0.5mL0.5mol/L稀盐酸的容量瓶收集,收集馏出液至干。另取一份肺宁合剂样品,处理方法同上,收集馏出液至干,测定。结果蒸馏液收集至100mL,已经收集得到供试品中95%的麻黄碱,考虑到测定的准确性和减少误差,收集馏出液至130mL即可。 供试液制备：正交试验9份样品每份取相当于麻黄药材0.4g的药液,分别定容至60mL,超过60mL的水浴至60mL,置250mL烧瓶中
7、,加入氯化钠7.5g,20%氢氧化钠溶液120mL,电热套加热,收集馏出液置预先加入0.5mol/L稀盐酸5mL的收集瓶中,收集至130mL,用蒸馏水定容至200mL,微孔滤膜滤过,即得。 2.4试验结果经过权衡,麻黄碱、伪麻黄碱含量是最主要指标,甘草酸含量为主要指标,浸膏得率和正丁醇萃取得率为次要指标。设麻黄碱、伪麻黄碱权重分别为Y＝0.3,甘草酸权重Y＝0.2,正丁醇萃取得率权重Y＝0.1,浸膏得率Y＝0.1,计算,综合得分＝麻黄碱含量得分×30%＋伪麻黄碱含量得分×30%＋甘草酸含量得分×20%＋正丁醇萃取部位得率得分×1
8、0%＋浸膏得率得分×10%。正交试验安排及结果见表2,方差分析见表3。表2正交试验安排及结果（略）注：F0.05(2,2)=19。甘草酸含量以峰面积最大的9号样品为基准,以9号样品的峰面积比值来计算出各份样品的甘草酸得分（略）表3方差分析结果（略）
