高效液相色谱电喷雾串联质谱法测定蜂蜜中5种头孢菌素论文

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1、高效液相色谱电喷雾串联质谱法测定蜂蜜中5种头孢菌素论文李学民曹彦忠张进杰范春林刘晓茂钱小清【摘要】建立了用高效液相色谱电喷雾串联质谱(LCMSMS)测定蜂蜜中5种头孢菌素残留量的方法。蜂蜜样品用磷酸盐缓冲溶液溶解，经OasisHLB固相萃取柱净化。5种头孢菌素在C18柱上以乙腈水为流动相梯度洗脱条件下完成分离，电喷雾电离串联质谱在正离子多反应监测模式下进行测定。添加浓度在2～100μg/kg范围时，回收率为84.2%～103.6%;相对标准偏差为3.89%～9.08%。本方法头孢唑啉的定量限为10μg/kg，头孢匹林、头

2、孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟的定量限为2.0μg/kg。【关键词】高效液相色谱电喷雾串联质谱;头孢菌素;蜂蜜1引言头孢菌素是分子中含有头孢烯和头霉烯两类β内酰胺类的半合成抗生素，具有广谱强杀菌、能耐酸、耐青霉素酶及过敏反应发生率比青霉素低的特点，主要对革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌具有杀菌作用1。随着头孢菌素化学研究的不断深入，在动物养殖及疾病治疗中广泛应用.freelg,6mL)：使用前分别用5mL甲醇、10mL水和5mL磷酸盐缓冲溶液预处理，保持柱体湿润。头孢唑啉(CAS：25953199)、头孢匹林(CAS：24356

3、603)、头孢氨苄(CAS：16549567)、头孢洛宁(CAS：5575213)、头孢喹肟(CAS：118443893)标准物质由Sigma公司提供;甲醇、乙腈为色谱纯;乙酸、NaOH、NaH2PO4为优级纯;磷酸盐缓冲溶液(0.15mol/L，pH=8.5)。其它试剂为分析纯。2.2液相色谱与质谱条件液相色谱条件：流动相A为水，含0.1%(V/V)甲酸;B为乙腈。梯度洗脱：0～2min,95%A;2～8min,40%A;8～15min,95%A。流速：200μL/min。色谱柱：ZORBAXSBC18(150

4、mm×2.1mm，3.5μm);进样量：20μL。质谱条件：离子源为电喷雾离子源(ESI);扫描方式：正离子扫描;检测方式：多反应监测(MRM);喷雾电压(IS)：5500V;雾化气(NEB)：0.055MPa，气帘气(CUR)：0.079MPa，辅助气(AUIX)：6L/min;离子源温度400℃。其它MRM条件见表1。表15种头孢菌素的定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞气能量1949分析化学第38卷第5期李学民等：高效液相色谱电喷雾串联质谱法测定蜂蜜中5种头孢菌素2.3标准工作溶液的配制准确称取每种头孢菌素标准物质，分别

5、用水配制成浓度为1.0g/L的标准储备溶液。取适量头孢菌素标准储备溶液，用空白样品提取液配制成适当浓度的基质混合标准工作溶液。2.4样品处理称取5g蜂蜜样品于150mL三角瓶中，加入25mL磷酸盐缓冲溶液溶解样品，混匀，用5moL/LNaOH溶液调节至pH=8.5。把样品溶液移至下接OasisHLB固相萃取柱的贮液器中，以3mL/min的流速通过固相萃取柱，先用5mL磷酸盐缓冲溶液洗涤三角瓶并过柱，再用2mL水洗柱，弃去全部流出液。用2mL乙腈洗脱，收集洗脱液于刻度样品管中，在40℃用氮气吹干，用2mL水溶解残渣,摇匀后，过0.2

6、μm滤膜，供液相色谱电喷雾串联质谱仪测定。3结果与讨论3.1提取溶液的选择根据蜂蜜样品的特点和被测物的性质，确定磷酸盐缓冲溶液作为提取液。通过回收率实验，比较了提取液中磷酸盐缓冲溶液浓度和pH值对5种头孢菌素回收率的影响。从图1a和b可见，当提取液中磷酸盐缓冲溶液浓度为0.15mol/L，pH=8.5时，5种头孢菌素回收率最佳。因此，本方法使用pH=8.5，0.15mol/L磷酸盐缓冲溶液作为提取液。3.2固相萃取柱洗脱条件的选择本方法比较了用1,2和3mL乙腈作为洗脱剂，对5种头孢菌素回收率的影响，结果见表2。实验表明，当洗脱

7、剂用量为2mL时，5种头孢菌素的回收率为94.5%～98.7%;当洗脱剂用量为3mL时，5种头孢菌素回收率没有明显改善。因此，本方法选用2mL乙腈作为洗脱剂。表2固相萃取柱洗脱剂用量对回收率的影响3mLEluant头孢唑啉Cefazolin92.798.797.6头孢洛宁Cefalonium96.798.196.3头孢匹林Cephapirin89.295.296.3头孢喹肟Cefquinome95.896.995.4头孢氨苄Cephalexin86.794.595.93.3液相色谱柱的选择分别使用μBondapakC18(300m

8、m×4.0mm，10μm)色谱柱和ZORBAXSBC18(150mm×2.1mm，3.5μm)色谱柱对5种头孢菌素的色谱行为进行了比较。实验发现，这两种色谱柱的灵敏度均能满足要求。但μBondapakC18色谱柱流速为1.0mL/min时，5种头