雌激素对老年雌鼠阴道nos及雌激素受体的影响

《雌激素对老年雌鼠阴道nos及雌激素受体的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、雌激素对老年雌鼠阴道NOS及雌激素受体的影响作者：饶婷张孝斌吴飞程帆葛名欢袁友光【摘要】目的研究雌激素对老年雌性大鼠阴道组织一氧化氮合酶（NOS）活性及雌激素受体（ER）亚型的影响，探讨雌激素作用于女性性功能的可能机制。方法SD雌性大鼠分三组：青年组（3月龄）、老年组（20月龄）、苯甲酸雌二醇治疗组，比色法检测阴道组织NOS的活性，免疫组化法检测ERα和β的表达。结果老年大鼠阴道NOS活性下降，而阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ表达增加，雌激素治疗能逆转这些变化。大鼠血清雌二醇浓度与阴道组织NOS活性呈正相关，两者均与阴道上皮细胞ERα、平滑肌

2、细胞ERα和ERβ呈负相关，而与大鼠阴道上皮细胞ERβ、基质纤维细胞ERα和ERβ无相关性。结论雌激素可以通过调节阴道NOS维持女性性功能，这一过程与阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ密切相关。【关键词】雌激素；女性性功能障碍；一氧化氮合酶；雌激素受体伴随老龄化和绝经期的到来，血雌激素水平下降，女性性功能障碍（FSD）发生率显著增加〔1，2〕，严重影响着女性生活质量。雌激素是维持女性性反应的重要内分泌因素，但其具体机制仍不清楚。近来研究发现，硝普钠和左旋精氨酸可促进兔阴蒂海绵体平滑肌的舒张〔3〕；在人体中，西地那非能增加阴蒂动脉血供，改善女性性唤

3、起、性高潮和性快感等FSD问题〔4〕。因此，与男性勃起功能机制类似，由一氧化氮合酶（NOS）催化L精氨酸生成的一氧化氮（NO）在女性性反应机制中亦有着重要作用。由此推测雌激素对女性性功能的调节机制中，NO为重要的中间环节，但雌激素如何调节NO进而维持女性性反应，尚需实验探讨。已知雌激素通过雌激素受体（ER）介导其生物效应，ER分为ERα和ERβ两种亚型，广泛分布于全身各部位，本研究通过观察雌激素对雌性大鼠阴道组织NOS活性及ER亚型的影响，探讨雌激素维持女性性反应的可能机制。　　1材料与方法　　1.1实验动物成年雌性SPF级SD未生育大鼠30只购于武汉大

4、学动物实验中心，随机分为3组：青年组（3月龄）10只，肌肉注射麻油0.1ml；老年组（20月龄）10只，肌肉注射麻油0.1ml；雌激素治疗组10只，20月龄老年大鼠肌肉注射生理剂量1mg/kg苯甲酸雌二醇。药物注射隔日一次，共30d。苯甲酸雌二醇由上海第九制药厂生产，用麻油稀释。　　1.2大鼠血清17β雌二醇水平放射免疫测定用药30d后，大鼠以水合氯醛麻醉，心脏穿刺取血2ml以3000r/min离心5min后将血清移入EP管，-20℃保存，用放射免疫荧光法（试剂盒购于北京科美东雅生物技术有限公司）统一测定雌激素。　　1.3NOS活力的检测取一定量新鲜标

5、本，称重加9倍重的生理盐水制备成10%的组织匀浆，3000r/min离心10min；按试剂盒说明书操作，取上清液200μl测NOS活力（NOS测定试剂盒，南京建成生物工程研究所），10μl测蛋白含量（BCA蛋白浓度测定试剂盒，武汉博士德生物有限公司）。NOS催化L精氨酸和分子氧反应生成NO，NO与亲核性物质生成有色物，在530nm的波长下测定吸光度，根据吸光度的大小可以计算出NOS活力。　　1.4免疫组织化学染色阴道组织10%中性甲醛固定，石蜡包埋。采用链霉卵白素过氧化物酶法(SP法)检测大鼠阴道组织ERα/β水平。一抗为兔多克隆抗体ERα（Santa

6、CruzBiotechnology,1∶100）和兔多克隆抗体ERβ（Upstate,1∶50），二抗为羊抗兔IgG。SP试剂盒和浓缩型DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。以PBS代替一抗作为阴性对照，细胞内出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞。用ImageproPlus图像分析系统分析阳性染色结果，每张切片随机观察5个视野，测其平均光密度值（OD值）。　　1.5统计学方法数据以x±s表示，统计处理采用SPSS13.0统计软件，单因素方差分析和直线相关分析。　　2结果　　2.1大鼠血清17β雌二醇含量老年组血清17β雌二醇含量为(13

7、.81±5.11)pg/ml，显著低于青年组(33.70±11.99)pg/ml和雌激素治疗组(34.32±7.47)pg/ml(P＝0.000)。　　2.2大鼠阴道NOS活性老年组阴道NOS活性为(4.17±1.81)U/mg·prot，显著低于青年组(10.68±2.0)U/mg·prot和雌激素治疗组(11.07±2.36)U/mg·prot(P＝0.000)。相关分析显示，大鼠阴道NOS活性与血清雌二醇浓度呈正相关（r＝0.798，P＝0.000）。　　2.3大鼠阴道ERα和ERβ免疫组化染色结果两种ER亚型在阴道组织中均有表达，在ERα免疫组化切

8、片中，棕黄色颗粒主要位于细胞核内；在ERβ免疫组化切片中，棕黄色颗