新西兰兔脊髓内水通道蛋白

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1、新西兰兔脊髓内水通道蛋白作者：孙国柱，张庆俊，赵宗茂，张更申，王浩【关键词】水孔蛋白　　Expressionanddistributionofaquaporin4inspinalcordofNeinetheexpressionanddistributionofaquaporin4(AQP4)innormalspinalcordofrabbits,soastoprovidetheoreticalbasisfortheroleofAQP4inspinalmunohistochemistryandinsituhybridizationedonspinalparaffinsectionsf

2、romhealthyadultrabbitstodetecttheexpressionanddistributionofAQP4protEinandmRNA.RESULTS:Thepositivecellsmostlyincludedependymalcellsofmyelocoele,glialcells,anteriorhornmotorneurons,andepithelialcellsofspinalpiamaterandthEIrexpressionsainlylocatedoncellmembrane.Interestingly,AQP4distributioningl

3、ialcellsandependymalcellsshoerainlyinthemembranesidecontactingostlyinthebasolateralmembraneofependymalcells.CONCLUSION:AQP4isicallocationssuggesttheAQP4maybeinvolvedinspinalcordetabolism,evencanbelocallyregulatedtomeetspecialfunctionalrequest.　　【Keymunohistochemistry;insituhybridization　　【摘要】目

4、的：探讨正常新西兰大白兔脊髓水通道蛋白4(AQP4)的定位与表达，为研究其在脊髓水代谢中的作用提供理论基础.方法：选用正常成年新西兰大白兔，采用免疫组化和原位杂交技术检测脊髓AQP4蛋白及其mRNA的定位及表达.结果：免疫组织化学染色和原位杂交结果显示胶质细胞、前角运动神经元、中央管室管膜细胞、软脊膜上皮细胞均表达阳性，AQP4主要分布于细胞膜，其中，胶质细胞和中央管室管膜细胞表达存在极性，前者主要分布在与毛细血管内皮细胞接触的一侧，后者主要分布在中央管室管膜细胞的基底侧膜.结论：AQP4在正常兔脊髓内具有广泛的表达，其表达的解剖定位提示AQP4在脊髓内主要参与水分子的转运及平衡调

5、节、电解质代谢，并受局部调节以适应特殊的功能需求.　　【关键词】水孔蛋白4；兔；脊髓；免疫组织化学；原位杂交　　0引言　　水通道蛋白(aquaporin,AQP)是一种疏水性膜蛋白家族，自1988年第一个AQP被发现［1］并于1997年正式命名为AQP1以来，目前已经发现11种之多.AQP广泛存在于动、植物的细胞膜上，介导调节水分子的跨膜转运［2-3］.其中，AQP4在中枢神经系统表达最为丰富，研究证实其在脑内主要分布于星形胶质细胞、软脑膜、室管膜、脉络丛以及下丘脑的视上核和室旁核等部位，参与了水分子的转运及平衡调节（如脑脊液的生成、重吸收）、电解质代谢和内分泌活动［4］.但有关A

6、QP4在脊髓的定位、表达和功能的研究有限，特别是在正常新西兰大白兔脊髓的分布少见报道.为此，我们应用免疫组化和原位杂交技术研究AQP4在新西兰大白兔脊髓的定位，推测其可能的生理功能，并为AQP4在脊髓病态的表达提供有益的对比资料.　　1材料和方法　　1.1材料成年健康新西兰大白兔6只(河北医科大学实验动物中心)，雌雄各3只，体质量1.5～2.0kg.一抗为鼠抗AQP4多克隆抗体（1∶200,Sigma公司）.SABC免疫组化试剂盒(北京中山金桥生物技术有限公司).AQP4原位杂交检测试剂盒(武汉博士德公司).　　1.2方法　　1.2.1标本的制备在氯胺酮过度麻醉下剪开动物胸腔，经心

7、脏灌注生理盐水500mL至流出液清亮后给予灌注40g/L多聚甲醛PBS缓冲液(pH7.3)500mL.先快后慢，灌注固定后经后正中切口、咬除棘突和椎弓根，取颈、胸、腰段脊髓各2小段，其中各脊髓节段1小段置入相同固定液中后固定24h用于免疫组化，剩余各脊髓节段置入相同固定液中后固定2h用于原位杂交.后固定成功后用蒸馏水清洗12h，逐级梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、4μm切片并裱于经10g/L多聚赖氨酸处理的清洁载玻片，用于免疫组织化学和原位杂交检测.　　1.2.2