沙枣多糖对小鼠免疫功能影响的研究论文

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1、沙枣多糖对小鼠免疫功能影响的研究论文廉宜君，李炳奇，肖芙蓉，吕新建【摘要】目的研究沙枣多糖(EAPS)对正常小鼠免疫功能的影响。方法将沙枣多糖分为3个剂量组(60，120，240mg·kg-1)，连续给小鼠ig7d，进行免疫脏器指数的检测、碳粒廓清试验、血清溶血素形成和绵羊红细胞诱导的迟发型超敏反应.freell，4℃保存；补体（豚鼠血清）。1.3仪器KQ-250型超声波提取仪，昆山市超声仪器有限公司产品；SENCOR502B旋转蒸发器，上海申生科技有限公司产品；SartoriusBS210S电子天平，北京塞多利斯天平有限公司产品；SHZ-C型循环水式多用真空泵，巩义市英欲予华仪器厂产品；72

2、2型光栅分光光度计，上海精密科学仪器厂产品；镀铬游标卡尺，湖北省教学仪器厂，精密度0.02mm。2方法2.1沙枣多糖的提取称取沙枣粉末200.0g，加少量水浸泡24h湿润。加入石油醚（沸程30～60℃）2.0L，在超声循环提取仪中提取30min，过滤。在滤渣中加入95%的乙醇2.0L，超声提取30min，过滤。在所得滤渣中加入蒸馏水2.0L，超声提取30min，重复用水提取3次。提取完毕后过滤、合并滤液，在旋转薄膜蒸发仪上减压浓缩至200ml。加入95%的乙醇使溶液中乙醇含量达到80%，低温静置过夜，抽滤，滤渣分别用乙醚、丙酮、无水乙醇洗涤数次，得灰白色粉末样物质，放入烘箱中于60℃干燥备用。

3、由苯酚-硫酸法测得提取物中沙枣多糖含量为50.28％。2.2检测项目及方法2.2.1实验动物分组及给药方式本实验设计了高、中、低3个剂量组(每组10只)，即小鼠每日每只经口给予(加入饮水法)沙枣多糖60mg·kg-1体重（低剂量)，120mg·kg-1体重（中剂量)和240mg·kg-1体重（高剂量)，分别相当于人体推荐用量的5，10，20倍。对照组给予正常饲料和饮水。连续给予受试物7d后活杀小鼠并测定各项免疫指标。2.2.2小鼠免疫器官重量的测定［3］称小鼠体重，颈椎脱臼处死小鼠，脾脏、胸腺称其湿重，计算脾指数和胸腺指数。脾指数=脾重量（mg）/体重（g）胸腺指数=胸腺重量（mg）/体重（g

4、）2.2.3单核巨噬细胞吞噬功能(碳粒廓清速率)的测定［4］末次给药后1h，称体重，各鼠均按0.1ml/10g剂量由尾静脉注入印度墨汁（以生理盐水按1:5稀释），注射后分别在1min(t1)、5min(t2)从小鼠眼眶静脉丛取血20μl，溶于2.0ml0.1%Na2CO3溶液中摇匀，放置20min后于680nm处测其吸光度值（A），以0.1%Na2CO3溶液做空白对照，将小鼠处死后取肝脏和脾脏，用滤纸吸干血迹后称重，根据公式计算廓清指数K值和校正廓清指数α值。计算公式：K＝（logA1－logA2）／(t2－t1)；α＝K1/3×体重/（肝重＋脾重）2.2.4小鼠血清溶血素的检测［5］给药第3

5、天，每鼠腹腔注射2％SRBC0.2ml致敏，并继续给药。致敏后第4于末次给药后90min取小鼠眼球血，静置1h，2000r/min离心10min，取上层血清20μl，用NS稀释500倍，取此血清样1ml作为补体，37℃温浴1h，反应结束，将反应管立即移入冰浴中，以终止反应，以2000r/min离心10min，取1ml上清液盛于由3ml都氏试剂的试管摇匀，放置10min后于540nm测其吸光度值（A）。计算小鼠的半数溶血值（HC50）。样品HC50=(样品的吸光度值/SRBC半数溶血时的吸光度值)×稀释倍数2.2.5迟发型超敏反应（DTH）检测按文献方法［6］给药第3天，每鼠腹腔注射2％SRBC

6、0.2ml致敏，并继续给药。致敏后第4日取20％SRBC50μl悬液注射在小鼠右侧足垫皮下，左侧注射50μl生理盐水，24h后用游标卡尺（精密度0.02mm）测定小鼠左右足垫厚度之差为肿胀程度。同一部位测量3次，取平均值。3结果3.1对小鼠免疫器官的影响结果（见表1）显示EAPS各剂量组均能增加小鼠胸腺和脾脏的重量。与对照组胸腺指数比较，EAPS在120mg·kg-1和240mg·kg-1剂量组有显著性差异(P0.05)；而60mg·kg-1剂量组无显著性差异(P0.05)；与对照组脾脏指数比较，EAPS在120mg·kg-1剂量组，呈极显著性差异(P0.01)；60mg·kg-1和240mg

7、·kg-1剂量组，均有显著性差异(P0.05)。表1沙枣多糖对小鼠免疫器官的影响（略）与对照组比较,*P0.05，**P0.01；n=103.2对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能(碳粒廓清速率)的影响由表2数据可知，EAPS各剂量组均能明显提高廓清指数和吞噬指数。与对照组比较，EAPS的120，240mg·kg-1剂量组廓清指数均达到极显著水平(P0.01)，EAPS的60mg·kg-1剂量组的廓清指数也