牛磺酸对大鼠视网膜光化学损伤c

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1、牛磺酸对大鼠视网膜光化学损伤c【关键词】,牛磺酸；视网膜光化学损伤；凋亡细胞；c　　摘要：目的观察饲料中添加牛磺酸对光化学损伤后大鼠光感受器细胞凋亡的影响，并进一步从氧化应激基因cfos表达变化角度探讨其防护机制。方法70只SD大鼠随机分为对照组、牛磺酸组。分别喂饲标准饲料或添加4％牛磺酸饲料喂饲15d后接受(3000±200)lx持续0，1，3，6，9，12,24h光照，凋亡细胞原位末端标记法(TUNEL)检测光感受器细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AI)；RTPCR法及免疫印迹法检测视网膜内cfosmRNA以及蛋白表达水平。结果感光细胞

2、凋亡指数随光照时间延长逐渐增加，牛磺酸组AI显著低于对照组(P<005)，其中光照12h牛磺酸组与对照组AI分别为(123±47)％和(324±62)％；视网膜cfosmRNA光照1h后一过性表达增高，牛磺酸组较对照组低(P<005)；光照后视网膜cfos蛋白表达逐渐升高，于3h达峰值，牛磺酸组显著低于对照组(P<005)。结论在视网膜光化学损伤条件下，牛磺酸可能通过抑制视网膜cfos的转录及表达，阻断光感受器细胞凋亡转导从而保护视网膜。　　关键词：牛磺酸；视网膜光化学损伤；凋亡细胞；cfos　　Effectsofta

3、urineoncfosexpressionofratretinaafterphotochemicaldamage　　Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofdietarysupplementationicaldamage.MethodsSeventyratslydividedintocontrolgroup(Control)and4%taurinesupplementationgroup(Taurine).Thesubjectsittedbysixcoldethod;TotalRNAandprotEi

4、nofretinaRNAlevelsinedusingRT-PCRandcfosprotEInlevelseprolonged,apoptosisindex(AI)ofphotoreceptorcellsongRNAofratretinaphotochemicaldamage.　　Keyicaldamage;apoptoticcell;cfos　　视网膜是视觉形成的重要组织结构，若光照时间或光照强度等超过视网膜承受力，则会导致光化学损伤〔1〕，损伤早期视功能减退，光感受器细胞丢失，后期内层神经元变性坏死，最终导致失明〔12〕。近年研究认

5、为，凋亡是视网膜光化学损伤中光感受器细胞丢失的主要机制〔1,3〕，持续高强度光照使视网膜内自由基和脂质过氧化产物激增，同时氧化应激基因AP1表达上调促进凋亡信号转导，且证实其亚单位cfos是必需调控因子。牛磺酸与视网膜生长发育和功能维持关系密切，前期实验已证实，4％牛磺酸能有效保护光化学损伤条件下的大鼠视网膜〔4〕。本研究拟进一步观察其对光感受器细胞凋亡的影响，并从cfos表达变化角度探讨防护机制。　　1材料与方法　　11实验动物及分组清洁级SD大鼠(第三军医大学第三附属医院动物中心)70只，体重150g左右，雌雄各半。随机分为对照组、

6、牛磺酸组，分别喂饲标准饲料或添加4％牛磺酸(北京世纪维他生物技术有限公司，纯品)饲料15d后，各组5只大鼠分别接受(3000±200)lx持续0，1，3，6，9，12，24h光照。　　12凋亡细胞的原位末端标记法(TUNEL)检测光感受器细胞凋亡情况大鼠光照后立即取出眼球，4％多聚甲醛固定过夜，常规石蜡切片，TUNEL试剂盒(德国Roche公司)检测视网膜光感受器细胞凋亡情况参照试剂说明书，计数10个油镜视野下每张切片TUNEL阳性细胞数，其与光感受器细胞总数比值为光感受器细胞凋亡指数(AI)。　　13视网膜总RNA提取及RTPCR大鼠

7、光照后立即取出眼球，解剖显微镜下小心剥离视网膜，参考Trizol试剂说明书常规提取总RNA，核酸蛋白检测仪测定其含量与纯度。-20℃保存备用。RTPCR按照逆转录试剂盒说明书进行，以大鼠βactin为内参，上游引物序列为5′GACCCAGATCATGTTTGAGACC-3′，下游引物序列为5′GCCAGGATAGAGCCACCAAT-3′，退火温度为554℃，产物长度为684bp；cfos上游引物序列为5′GCCTTTCCTACTACCATTCC-3′，下游引物序列为5′ATCTTATTCCTTTCCCTTCG-3′，退火温度为533℃

8、，产物长度为370bp。扩增条件为94℃5min40s，各退火温度45s，循环32次，72℃10min。2％琼脂糖凝胶电泳，Bio-Rad凝胶成像分析系统扫描以及分析。PCR特异条带以相对吸光度×面积(mm