肺炎链球菌检测方法及耐药研究论文

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1、肺炎链球菌检测方法及耐药研究论文【关键词】肺炎链球菌检测方法耐药研究肺炎链球菌（StreptococcusPneumoniae,SP）是儿科社区获得性感染的主要病原菌之一，它可引起儿童肺炎、脑膜炎、败血症、中耳炎、鼻窦炎。据.Porcel等人采用该试剂盒对患者的胸水进行检测，发现敏感性为70.6%，特异性为93.3%。该方法较突出的优点是抗生素的使用并不影响检测结果的准确性，因此它不能用于评价抗生素治疗效果。在感染后1月内该试验均可阳性，这也造成了那些反复感染的病例被误诊的潜在可能性。特别在儿童中，由于SP的定植造成该试验非特异性阳性的问题已逐渐引起了关注。尽管该试验在SP感染的儿童中敏感

2、性较高，但在尿抗原检测呈阳性的病例中仍有7%～15%的病例没有SP感染的临床证据［4］。ICT虽然在SP鼻咽携带者中存在假阳性结果，但由于ICT标本采集简便，不具创伤性，不受先前抗生素治疗干扰，具有较高的敏感性和特异性，15min便可完成检测等优点，是快速诊断SP感染的简便方法。1.3聚合酶链式反应聚合酶链式反应（PCR）敏感性高，特异性强，实时荧光定量PCR可对扩增产物进行可重复定量检测，在扩增的每个循环中至少收集一次荧光数据，对扩增产物进行实时监控，从而增加PCR的敏感性和特异性。2001～2004年，AlbanLeMonnier等［5］对社区获得性肺炎患者的胸腔积液进行SP16SrD

3、NA基因检测，发现该试验的敏感性为77%。在抗生素治疗初期，PCR不受其干扰，因此为早期诊断提供了较可靠的依据。然而，与ICT相比，PCR是一种复杂、耗时的检测方法，还未完全标准化，从而妨碍其成为SP临床诊断方法，主要作为实验研究的技术方法。2耐药现状及耐药机制2.1β内酰胺类抗生素在上个世纪四、五十年代，当青霉素被应用于临床初期，SP对青霉素是相当敏感的。当时大部分菌株的青霉素MIC0.015～0.03mg/L。上世纪60年代，在澳大利亚和新几内亚，部分SP出现了对青霉素敏感性降低的现象，分离出对青霉素耐药的SP（penicillinresistantstreptococcuspneu

4、moniae,PRSP）。70年代末，南非报道了对青霉素高水平耐药的菌株，这些菌株的青霉素MIC高达2～4mg/L。在美国，SP对青霉素的耐药情况在70年代及80年代初没有显著的变化，持续保持在10%或更低。但在80年代末及整个90年代，SP对青霉素的耐药性发生了戏剧性的变化，不敏感率显著增加。有报道称，在1993～2004年，耐药菌株增加了近30倍。亚洲地区耐药性病原监测网（ANSORP）的监测结果表明SP对青霉素的耐药率为29.4%，不敏感率为52.4%［6］。2000～2002年儿童鼻咽部分离887株SP对青霉素耐药率为6.4%，青霉素不敏感率39.9%［7］。2001年美国临床实验

5、室国家标准委员会（NationalmitteeforClinicalLaboratoryStandards,NCCLS）判断SP对青霉素耐药的标准是：MIC≥2mg/L为耐药；MIC0.12～1.0mg/L为中度耐药；≤0.06mg/L为敏感。青霉素耐药的产生是由于细胞壁上一种或多种青霉素结合蛋白（PBP）的改变，这种改变同样可以影响到PBP与整个β内酰胺类抗生素的结合［8］。如果抗生素在感染部位有足够浓度的话，这种耐药机制即可被克服。在呼吸道感染的情况下，只要给予适当剂量的药物，大部分的SP对β内酰胺类抗生素，比如静脉滴注头孢曲松和口服阿莫西林仍然保持敏感。2.2大环内酯类和林可霉素

6、类抗生素SP对大环内酯类药物的耐药率在近20～30年间迅速增长。AlexanderProject［9］研究结果显示，1998～2000年全球红霉素耐药率为24.6%。亚洲国家耐药程度比欧美国家严重，ANSORP的监测结果表明，1998～2001年亚洲地区对大环内酯类抗生素耐药的SP（macrolideresistantstreptococcuspneumoniae,MRSP）占59.3%［10］。我国北京、上海、广州三家儿童医院上呼吸道感染患儿鼻咽部SP红霉素耐药率为84.3%［6］。SP对大环内酯类的药敏试验分为三种情况：敏感（MIC1mg/L）、低度耐药（MIC1～32mg/L）和高

7、度耐药（MIC64mg/L）。低度耐药和高度耐药的临床特点即对现有的所有大环内酯类药物均出现耐药，两者不同之处在于前者对林可霉素通常敏感。两者的耐药机制也有所不同：低度耐药常常由mefA基因介导，耐药表型为M型（即对大环内酯类耐药而对林可霉素类敏感）；高度耐药常常由ermB基因介导，耐药表型为MLSB型（即对大环内酯类、林可霉素类和链阳霉素B类均耐药）。M型的耐药机制为泵出机制，即将细胞内的大环内酯类药物移至细胞外；ML