血小板源性生长因子对人视网膜色素上皮细胞的作用论文

《血小板源性生长因子对人视网膜色素上皮细胞的作用论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、血小板源性生长因子对人视网膜色素上皮细胞的作用论文.freelLL-1小牛血清的DMEM组（20gL-1DMEM），每组分别加入不同浓度（0.1，1，5，10，50和100μgL-1）的PDGF，然后采用MTT比色法观察分析其对hRPE的增殖作用;应用hRPE损伤模型.freelLL-1FBS+DMEM组达640%.结论PDGF能够促进hRPE的增殖和移行，有血清时可以加强这种作用，提示它在PVR的发病过程中可能发挥了重要作用.Keyanretinalpig-mentepitheliumcells;proliferation

2、;migrationAbstract:AIMToinvestigatetheeffectsofplatelet-derivedgroigrationofculturedhumanretinalpigmentepitheliumcells（hRPE）.METHODSCulturedhRPEofthe4～6thpassageodifiedEagle’smedium）and20mLL-1FCS+DMEM（20gL-1DMEM）.PDGF（0.1～100μgL-1）edium.RPEprolifera-tionesuredbycol

3、orimetricassayforcellulargroodelinallareaofaconfluentmonolayerofhRPEedi-um，migrationeasuredafter24hoursasthenumberofcellsthathadenteredthedenudedarea.RESULTS①Pro-liferation:PDGFstimulatedtheproliferationofhRPE.ThemaxiumproliferationrateofRPEulatedhRPEmigrationinado

4、se-dependentmanner.At50～100μgL-1，themaxiummigrationrateulateshRPEprolif-erationandmigration，thepresenceofserumcanincreasethiseffects，plythatPDGFmayplayanimportantroleinthedevelopmentofproliferativevitreoretinopathy.0引言在增生性玻璃体视网膜病变患者的玻璃体和视网膜下液中已检测到明显增高的血小板源性生长因子（PDG

5、F）［1］，一些体外实验表明，培养的视网膜色素上皮细胞（hRPE）能够自分泌或旁分泌PDGF并表达其受体［2］.由于该因子对多种细胞有促有丝分裂活性和化学趋化性，而且参与创面愈合的全过程［3］，我们采用体外培养的方法，观察PDGF对人视网膜色素上皮细胞（hRPE）增殖和移行能力的影响.1材料和方法1.1材料Delbecco’smodifiedEagle’smedium（DMEM，Gibco，USA），小牛血清（杭州四季青），胰酶（Gibco，USA），3-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT，Sigma，USA），人重组PDGF

6、-BB（Sigma，USA），12孔、96孔培养板（NUNC，丹麦），丝裂霉素（Sigma，USA），二甲基亚砜（DMSO，Sigma，USA），Bio-Red550型酶联免疫检测仪（日本）.1.2方法人RPE细胞由西京医院眼科王雨生副教授惠赠［4］的四种不同来源的人视网膜色素上皮细胞，第4～6代用于实验.复苏与培养方法同王琳等［5］报告.增殖实验以含100mLL-1小牛血清的DMEM将细胞浓度调整为2×107L-1，接种于96孔板（200μL/孔），37℃，50mLL-1CO2的孵箱中过夜，吸弃旧培养液，分成两组:DMEM

7、和含20mLL-1小牛血清的DMEM（20gL-1DMEM）.每组分别加入不同浓度的PDGF（0，0.1，1，10，50和100μgL-1），每个浓度设6个复孔，培养72h后，加入MTT（20μL/孔，5gL-1），继续培养4h，吸弃培养液，PBS冲洗2次.加入DMSO（150μL/孔），振荡10min，490nm波长测定其A值.实验重复3次.移行实验以100gL-1DMEM将细胞浓度调整为1×107L-1，接种于12孔板（2mL/孔），37℃，50mLL-1CO2的孵箱中孵育至融合状态.加入2gL-1的丝裂霉素作用1h.用

8、剃须刀刮出一3mm×3mm的无细胞区，PBS冲洗3次后，分为DMEM和20gL-1DMEM组，分别加入不同浓度的PDGF（0，0.1，1，10，50和100μgL-1），每个浓度设3个复孔，观察3d，每日计数进入缺损区的细胞数并测量其移行的距离.实验重复3次.统计学处理:将实验数据应用or