高效液相色谱法测定地黄寡糖中水苏糖含量论文

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1、高效液相色谱法测定地黄寡糖中水苏糖含量论文安阳，杨菁，岳春丽，刘影【摘要】目的建立高效液相色谱法测定地黄寡糖中水苏糖含量方法。方法采用菲罗门RezexRPM-MonosaccharidePb++8%（7.8mm×300mm）色谱柱，以水为流动相，流速0.8ml/min，示差检测器测定地黄寡糖中水苏糖含量。结果在该色谱条件下，水苏糖在0.20～3.20mg/ml范围内峰面积和进样质量有良好的线性关系.freelethodfordeterminationofstachyosecontentsinRehmann

2、iaGlutinosaOligosaccharides(ROS).MethodsStachyoseinedm×300mm）column,obilephaseanddifferentialrefractiveindexdetector.ResultsThecorrelationcoefficientbetpleaveragerecoveryethodissimple,rapid,specific,accurateandreproducible.KeyanniaGlutinosaOligosaccharide

3、s(ROS);Stachyose;HPLC地黄首载于《神农本草经》，为玄科多年生草本植物（RehmanniaglutinoseLibosch）的根。地黄常被作为益智药物使用。地黄饮子治疗血管性痴呆39例，总有效率可达66.67%［1］。地黄饮子证明对中风患者的神经功能恢复具有良好的治疗效果［2］。熟地黄水煎剂可以改善AlCl3导致痴呆小鼠和大鼠的学习记忆功能［3］。尽管地黄的药理作用得到人们认可，但地黄发挥作用的具体成分并不清楚。由于以上地黄制剂在使用时均为其水溶性成分，因此，推断其发挥作用的应为水溶性成

4、分。在此推论的基础上制备了地黄寡糖［4］(Rehmanniaglutinosaoligosaccharides，ROS)，研究表明，ROS对缺血再灌导致的大鼠学习记忆损伤具有保护作用［4］；对谷氨酸诱导的神经细胞损伤具有保护作用［5］。为进一步探讨ROS发挥药理学作用的物质基础，对ROS中的水苏糖含量进行了测定。1仪器与试剂日本岛津液相色谱仪一套，包括LC-20ATVP色谱泵、RID-10A示差检测器、柱温箱、LCsolution1.03色谱工作站；KQ-250B超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司生产；

5、SYS-550型石英亚沸高纯水蒸馏器，由金坛市丹阳门石英玻璃厂生产；水苏糖对照品，购于北京慧德易科技有限责任公司，纯度99.8%。ROS，自制，批号为20080301，20080302，20080303，20080304，20080401，20080402。2方法与结果2.1溶液的制备2.1.1对照品溶液的制备精密称取水苏糖对照品适量，加水制成每毫升含1.0mg的溶液，即得。2.1.2供试品溶液的制备即自制ROS，稀释10倍，用0.45μm的膜滤过，作为供试品溶液。2.2色谱条件色谱柱：菲罗门RezexR

6、PM-MonosaccharidePb++8%（7.8mm×300mm）；流动相：水；流速：0.8ml/min；柱温：80℃，示差检测器，进样量：10μl。结果表明供试品溶液在水苏糖位置上有相应的峰存在，且与其它色谱峰可以基线分离。表明水苏糖在此色谱条件下分离良好。理论塔板数按水苏糖计，应不低于3000。色谱图见图1。2.3线性关系实验分别精密称取水苏糖对照品，加水配制浓度分别为0.20，0.40，0.80，1.60，3.2mg/ml的溶液，按色谱条件分别进样10μl，测得峰面积，以对照品浓度为横坐标，以

7、峰面积为纵坐标，得线性回归方程为：Y=100409X-3340.9，r=0.9995。结果表明水苏糖在0.20～3.20mg/ml时，浓度与峰面积呈良好线性关系。2.4精密度和稳定性实验取同一供试品溶液，按上述色谱条件，重复进样6次，10μl/次，测定水苏糖峰面积，其RSD为1.2％，表明此法的精密度良好。取同一供试品溶液，并分别于0，3，6，9，12，24h，按上述色谱条件，进样10μl，测定水苏糖含量，RSD为1.9%，表明水苏糖在24h内稳定。2.5加样回收率实验取供试品6批，分别加入水苏糖对照品1

8、或2mg，按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，进样，计算回收率，见表1，平均回收率为99.91%，RSD为1.20%。表1回收率实验结果（略）2.6样品的测定取批号为20080301，20080302，20080303，20080304，20080401，20080402，20070101，20070102，20070103的ROS，按上述方法测定水苏糖含量，结果其水苏糖含量均在9.0～12.0mg/ml之间。3讨论水苏糖在