白芍高效液相色谱指纹图谱的研究论文

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1、白芍高效液相色谱指纹图谱的研究论文【摘要】目的研究白芍的高效液相色谱指纹图谱，为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。方法利用HPLC方法，梯度洗脱，测定了21批白芍样品。色谱条件为：HypersilC18柱（4.6mm×200mm，5μm），流速1.0ml/min,柱温25℃，流动相A为乙腈；流动相B为0.05%磷酸水，流动相A梯度洗脱(95%～65%乙腈).freelin，时间为0，15，25，60min，A(%)为95%，86%，86%，65%。结果21批白芍样品获得包括芍药苷（7号峰)在内的14个共有峰。聚类分析和相

2、似度分析结果一致。结论白芍的指纹图谱特征性及专属性强，可用于全面控制白芍的质量，确保每批产品的均一性。【关键词】白芍芍药苷高效液相色谱指纹图谱Abstract：ObjectiveToestablishasensitiveandspecificHPLCmethodforcontrollingthequalityofRadixPaeoniaeAlba．MethodsHPLCmethodentofRadixPaeoniaeAlba．Column：HypersilC18column（4.6mm×200mm，5μm）；flol/min

3、；columntemperature：25℃;mobilephase：acetonitrile（A）andH2O(acidifiedto0.05%in，respectively．ResultsTheHPLCchromatographicfingerprintofRadixPaeoniaeAlba，sho21lotsofRadixPaeoniaeAlbaproducts．Theresultsofsimilarityanalysiseasthatofherarchicalclusteranalysis.ConclusionThe

4、chromatographicfingerprintofRadixPaeoniaeAlbam×200mm，5μm）（大连Elite公司）；流动相为A：乙腈；B：0.05%磷酸水；柱温25℃。线性梯度见表1。表1梯度洗脱（略）2.2检测波长确定取样品溶液，分别在210，230，254，272nm处检测。结果表明，254，272nm处各色谱峰之间分离度好，但峰数少；210nm检测，峰数与230nm检测基本一致，但基线不稳定，不能准确积分；以230nm检测，峰数多，基线平稳，故选之。2.3提取方法的考察本实验对甲醇、95%乙醇索氏

5、提取，甲醇、50%乙醇回流提取，甲醇、95%乙醇超声提取，对提取溶剂、提取方法进行了考察。结果表明，95%乙醇超声提取45min后,所得色谱峰的峰数为最多。后又对50%，75%，95%乙醇超声提取进行实验，发现三者之间峰数无显著性变化，本文采用50%乙醇作为提取溶剂进行超声提取。2.4对照药材和供试品溶液的制备精密称取对照药材和样品干燥粉末各1.1g，分置50ml量瓶中，精密加入50%乙醇50ml，称定重量，超声提取45min，冷却，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，用流动相（乙腈-0.05

6、%磷酸水（12∶88））稀释至10ml，摇匀，过0.45μm滤膜，各取续滤液作为对照药材溶液和供试品溶液。2.5对照品（参照物）溶液制备精密称取芍药苷对照品适量，加50%乙醇制成每毫升含80μg的溶液，即得。2.6色谱条件的确立根据上述结果，最终确立的色谱条件为：色谱柱：HypersilC18柱（4.6mm×200mm，5μm）（大连Elite公司）流动相：乙腈-0.05%磷酸水，梯度见表1；检测UV230nm；流速1.0ml/min；柱温:25℃。在上述色谱条件下，取对照品溶液、对照药材溶液和样品溶液各进样10μl进行HP

7、LC-FP测定，结果对照药材与样品中的各个峰分离较好，对照品芍药苷峰与样品中芍药苷峰保留时间一致，并且与样品中其它组分达到了很好的分离。2.7精密度实验精密称取12号样品，按供试品溶液制备方法操作，连续进样6次，记录其指纹图谱。用国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范”软件(版本2004A)处理数据，结果表明，各色谱峰的相对保留时间和其相对峰面积比值相当一致，RSD为0.53%～1.33%，小于3.0%，符合指纹图谱的要求。2.8稳定性实验精密称取12号样品，按供试品溶液制备方法操作，分别在0，2，4

8、，8，16，24h检测，记录其指纹图谱。结果表明，各色谱峰的相对保留时间和其相对峰面积比值一致，RSD为0.76%～2.46%，小于3.0%，符合指纹图谱的要求。2.9重现性实验精密称取12号样品，按供试品溶液制备方法操作，连续进样6次，记录其指纹图谱。结果表明，各色谱峰的相对保留时间和其