豚鼠oddi括约肌内cajal样细胞及nos表达阳性神经元的分布

《豚鼠oddi括约肌内cajal样细胞及nos表达阳性神经元的分布》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、豚鼠Oddi括约肌内Cajal样细胞及NOS表达阳性神经元的分布作者：张红军于彬梅峰周德山　【摘要】目的研究Cajal样细胞和一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)表达阳性神经元在成年豚鼠Oddi括约肌(sphincterofOddi，SO)的分布。方法成年豚鼠SO冷冻切片，cKit免疫细胞化学和NADPH黄递酶组织化学双重染色。结果SO横切面环行平滑肌层内可见少量cKit阳性细胞，胞体呈梭形，两端伸出细长的突起。纵切面SO的两个壁分别为：外侧壁和十二指肠壁内SO壁，前者与肠壁结构类似，在深肌丛和肌间神经丛周围可见较多的

2、cKit阳性细胞；而十二指肠壁内SO壁的肌层内存在大量cKit阳性细胞和突起，其形态与肠壁肌层内Cajal细胞相似。NADPH黄递酶组织化学染色可见NOS表达阳性神经元广泛分布于SO的肌间神经丛和平滑肌内。cKit免疫细胞化学和NADPH黄递酶组织化学双重染色虽未发现二者的共存，但可见cKit阳性细胞及突起存在于NOS表达阳性神经元的附近。结论豚鼠SO内存在的Cajal样细胞可能参与SO自主节律性运动的调控，可能是NOS表达阳性神经元对SO运动发挥调节作用的靶细胞。【关键词】神经元Oddi括约肌Cajal细胞NADPH黄递酶cKit豚

3、鼠【Abstract】ObjectiveTostudythedistributionofICClikecellsandNOSpositiveneuroninadultguineapigsphincterofOddi(SO).MethodsCryosectionsofSOsamplesfromadultguineapigsinedfordetectionofcKitandforNADPHdiaphorasebyimmunocytochemistryorhistochemistry.ResultsIncrosssections,afemunop

4、ositivecellsoothmusclelayersofSO.ThecellserilartointestinalanycKitpositivecellsuscularplexusandthemyentericplexus.PlentyofcKitpositivecellsandprocessesusclelayersoftheintraduodenaluscularinterstitialcellsofCajal(ICCIM)intheintestinalberofNOSpositivenervefibersyentericplexusa

5、ndsmoothmusclelayersofSO.AlthoughnoNOSreactiveneuronsicprocessesclosetotheNOSpositiveneuronsaybeinvolvedintheregulationoftheautorhythmmovementofSOandperhapsarethetargetsofNOSpositiveneuronsmediatingthemotilityofguineapigSO.【Keyg/kg)。切开十二指肠，分离完整的SO，生理盐水充分漂洗。1.2实验方法1.2.1cKit免疫细

6、胞化学染色标本OCT包埋(Sakura，日本)，液氮冷冻，恒冷箱冷冻切片(厚5～8μm)，风干。100%丙酮固定10min，1%BSA封闭30min，大鼠抗小鼠cKit单克隆抗体(ACK2，eBioscience，美国，1∶100)4℃孵育48h。二抗为辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗大鼠多克隆抗体(DAKO，丹麦，1∶100)室温90min。DAB(Sigma)显色，苏木精轻度复染。OlympusBX41镜下观察、记录。用正常大鼠血清代替一抗作为阴性对照，正常十二指肠壁作为阳性对照，各步骤间PBS充分漂洗。1.2.2NADPHd组织化学染色冷

7、冻切片100%丙酮固定10min，PBS漂洗，NADPH(1mg/ml)(Orientalyeast，日本)，四唑硝基氮蓝(0.4mg/ml)(上海化学试剂公司)和0.5%TritonX100的混合液中孵育45min(37℃)。1.2.3cKit免疫细胞化学与NADPHd组织化学双重染色NADPHd组织化学染色后的切片经PBS反复漂洗，再进行cKit免疫组织化学染色。方法同前。cKit免疫细胞化学染色反应产物为棕黄色（阳性）。NADPHd组织化学染色产物为深蓝色（阳性）。2结果2.1Cajal样细胞在SO的分布SO部位的横切面呈环状，内

8、面为Vater壶腹黏膜和皱襞，外侧面为十二指肠黏膜，中间以环行平滑肌为主，纵行平滑肌不发达，部分肌纤维与十二