血小板及功能检测进展

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1、血小板及功能检测进展【关键词】血小板血小板功能检测正常血循环中血小板在静息状态下呈双凸碟形，由细胞膜包裹着含少量颗粒的物质，平均直径2.4μm，平均容积7.2fl,寿命7d～10d。　　1血小板数量检查　　1.1目测计数法　　将血液用适当的稀释液作一定量稀释，混匀后充入计数池内，在显微镜下计数一定体积内的血小板数量，经过换算得出每升血液中血小板数。　　1.2细胞分析仪计数法　　1.2.1电阻抗法　　血小板通过小孔引起电阻变化，产生的脉冲经数字化后，根据不同的阈值，计算机分别给出血小板数目。　　1.2.2光散射法　　折射率与细胞内容物有关，血小板有别于

2、红细胞等其它非血小板颗粒，其折射率较低，通过低角度光散射即可与红细胞区别。　　2血小板形态、结构检查瑞氏染色，显微镜观察；MPV检查，应用全自动血细胞计数仪检测。　　3血小板功能检查　　3.1血块收缩试验(CRT)　　血块收缩时有相应的血清析出，计算占原有血量的百分数。　　3.2血小板粘附试验　　一定量血液与一定表面积的异物接触后，即有相当数目的血板粘附于异物表面上，测定接触面后血小板数之差，可求出占血小板总数的百分率。　　3.3血小板聚集试验　　血小板聚集是血小板的主要功能之一，主要有比浊法、剪切诱导血小板聚集测定法、散射性粒子检测法、全血电阻抗法

3、、血小板计数法、微量反应板法等。　　3.3.1比浊法　　在特定的搅拦条件下，在富含血小板血浆中加入诱导剂后，由于血小板发生聚集，悬液的浊度随之下降，根据描记曲线可以计算血小板聚集程度及速度［1］。　　3.3.2剪切诱导测定法　　不加诱聚剂，血小板在高剪切力环境下血小板聚集，根据比浊法的原理采用旋转式铁板流体测定仪，仪器绘制成聚集曲线，以观察体外血小板聚集变化。　　3.3.3散射性粒子检测法　　　该技术是将半导体激光(波长675m)通过聚光镜折射成宽度约50μm的带状光束，照射到装有PRP的比色杯，采用显微镜的接物镜，使血小板发出的散射局限在一个狭小的

4、范围内测定，通过测得聚集块的大小及生成数量这两个指标来评价其凝聚功能。　　3.3.4全血电阻抗法　　使用全血血小板聚集仪，通过记录浸泡于血液电极间的微小电流或电阻变化而形成的聚集曲线，以观察体外血小板聚集变化。　　4流式细胞术检测血小板活化的方法及应用血小板活化是止血和血栓形成的主要原因［1］，检测血小板活化值，是对反映血栓形成的诊断、预防、治疗监测的重要手段［2］。　　4.1三色流式分析方法检测血小板活化　　三色流式分析法是在常规FCM检测基础上发展起来的一种多参数分析，可以更全面、更系统的获得血小板相关信息。血小板活化试剂：1PAC1FITC

5、抗体：IgM型，与活化的GPb/a复合物结合，是早期血小板活化标志物；2CD62pPE抗体：IgM型，血小板活化时表面的CD65p结合，是血小板活化后期的标志物；3CD61PerCP:IgG1型，特异的泛血小板表面标记，既与活化血小板结合，也与未活化血小板结合。　　4.2细胞内钙离子测定　　FCM还能检测反映活化血小板功能的非免疫性指标。由于血小板活化时细胞内的钙离子浓度发生很大变化，借助于Ca2+敏感荧光探针，用FCM测定钙离子浓度，可以作为活化血小板监测的非免疫性指标。　　4.3阿的平检测活化血小板的释放功能　　阿的平能进入血小板致密颗粒，血

6、小板活化时用FCM可以通过检测荧光强度来显示，因此，也可以作为一个非免疫性检测指标。　　5血小板微颗粒的检测血小板微颗粒(PMP)是血小板在不同刺激因素作用下细胞膜向外伸展变形的细胞膜部分以出芽方式形成小泡或伪足脱落进入微循环而形成的细小微粒。由于PMP体积极小，因此传统检测方法必须借助电镜、共聚焦显微镜、荧光显微镜等进行肉眼观察，或是将分离后的PMP用电泳转移到硝酸纤维膜上，以P的检测受到很大限制。FCM测定法可利用PMP表面抗原荧光抗体进一步对其加以区别，根据其前向角散射光(FS)及荧光强度(FI)进行定量。由于PMPs直径约为0.031mm，常

7、规方法的灵敏度和分辨率不够，使得PMPs的检测受到限制。发展的FCM内参定位法检测PMPs血小板微粒，成功的解决了上述问题，使FCM在PMPs测定及血小板活化监测方面得以推广，有利于实验结果的室间比较和检测方法的标准化。　　6血小板抗体血小板抗体可以引起多种临床疾病或症状，如同种或自身免疫性血小板减少症，输血后紫癜，血小板输注无效等。血小板抗体的检测方法，已报道有多种［3］，如血小板免疫荧光试验、固相红细胞粘附试验(SPRCA)、单克隆抗体特异性血小板抗原固定术(MAIPA)、改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验(MACE)、流式细胞术法等。血小板相关抗体

8、主要是PAIgG,还有PAIgM和PAIgA，有资料证明，IgM具有较高的结合价和凝集能力，只需一个分子Ig