fk506治疗大鼠早期膜性肾病的实验研究

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1、FK506治疗大鼠早期膜性肾病的实验研究作者：贾冶王晶顾华吴曼郭桥艳徐锋刘庆鑫许钟镐苗里宁【摘要】目的观察FK506治疗大鼠膜性肾病的疗效。方法复制组)，FK506治疗组(FK506组)，每组12只。用阳离子化牛血清白蛋白制作大鼠膜性肾病模型,于正式免疫开始后2、4、6、8embranousnephropathyinrat.MethodsMembranousnephropathyratsalcontrol(N),membranousnephropathy(M),andFK506treatment(FK506)groups.UrinaryprotEinexcretioneasureda

2、t2,4,6,8thebeginningofimmunization.Theratbloodoved.ThebloodsampleseasuringthelevelsofserumBUN,ScrandALB.Kidneyspecimensicroscopy.ImmunohistochemistrymethodedtoobservetheexpressionsofTGFβ1andNFκB.TGFβprotEInexpressioneasuredbyALBingroupMmunohistochemicalfindings.ConclusionsALBmunohistochemist

3、ryshoprovekidneypathologicalchanges,inhibitTGFβ1overexpressionandNFκBactivationinrenaltissueofmembranousnephropathyrats,andcanbeusedfortreatmentofearlymembranousnephropathy.　　【Keybranousnephropathy　膜性肾病(membranousnephropathy，MN)是中老年人常见的肾脏疾病，临床以无症状蛋白尿或肾病综合征为主要表现，病理以肾小球基底膜(GBM)上皮细胞下弥漫的免疫复合物沉着伴基

4、底膜增厚为特点。MN的病因及机制尚不清楚，目前治疗主要应用激素加免疫抑制剂。FK506做为一种新型的免疫抑制剂，目前主要用于器官移植，并且在治疗特异性皮炎、系统性红斑狼疮、自身免疫性眼病等疾病中发挥作用，而在治疗肾小球肾炎，尤其是MN方面的研究尚少。本实验观察FK506对MN模型大鼠24h尿蛋白定量、肾功能、肾组织TGFβ1、NFκB的影响，旨在探讨FK506对MN的治疗作用及其机制。　　1材料与方法　　1.1主要试剂和材料FK506(爱尔兰藤泽药品有限公司)，牛血清白蛋白(上海缘聚生物科技有限公司)，碳化二亚胺(沈阳国药集团)，兔抗大鼠TGFβ1多克隆抗体(北京莱博生物实验材

5、料研究所)，兔抗大鼠NFκBp65多克隆抗体(NFκB)(武汉博士德生物工程有限公司)，考马斯亮蓝法测尿蛋白试剂盒(南京建成生物工程有限公司)，免疫组织化学试剂盒(美国DakoCorporation)。　　1.2方法健康N模型，根据实验用药，将动物随机分为3组，每组12只。正常对照组(N组);模型组(M组)，不予任何药物治疗;FK506治疗组(FK506组)，由开始正式免疫第3周起每天给予FK506(2mg/kg)灌胃，共4in，3000r/min，取血清保存在-70℃冰箱待测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)水平。最后剖开腹腔，游离肾脏，取多块肾组织，一部分在

6、-70℃冰箱保存，一部分置于10%中性甲醛溶液中固定。　　1.3免疫组织化学法采用免疫组化染色法，检测肾组织中TGFβ1和NFκB的表达情况。石蜡切片常规脱蜡水化;1%H2O2作用15min，PBS洗;0.05%胰蛋白酶液37℃作用30min，PBS洗;10%正常山羊血清孵育15min抑制非特异性结合;滴加TGFβ1和NFκB一抗，4℃过夜，PBS洗;滴加二抗(生物素化兔抗鼠IgG)，37℃孵育30min，PBS洗;滴加复合物(链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶溶液)，37℃孵育30min;DAB显色，水洗后用苏木素复染，透明封片。　　1.4N模型的建立实验中发现大鼠自正式免疫后

7、2.　　2.3免疫组化染色结果。　　2.3.1TGFβ1免疫组化染色结果N组大鼠肾脏中TGFβ1阳性染色主要出现于皮髓交界的肾小管上皮细胞胞浆内，肾小球内几乎无表达;而M组大鼠肾小球系膜细胞、上皮细胞、内皮细胞及周围肾小管上皮细胞内均有表达;FK506组肾脏中TGFβ1阳性染色强度和范围均较M组明显减轻(见图1A)。　　2.3.2NFκB免疫组化染色结果N组大鼠肾组织的肾小球囊侧壁上皮细胞、系膜细胞和肾小管上皮细胞内可见少量阳性染色，且以胞质内表达