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《索拉菲尼对不同人肝癌细胞株抑制增殖及促凋亡作用的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、索拉菲尼对不同人肝癌细胞株抑制增殖及促凋亡作用的研究摘要：目的探讨索拉菲尼对不同人肝癌细胞株抑制增殖、促进凋亡作用及敏感性。方法体外培养肝癌细胞株Huh7、MHCC97H.HepG2、SMCC7721.HepG2.2.15、PLC,各细胞株分为实验组及对照组，以不同浓度索拉菲尼对实验组进行干预，通过CCK8法检测出不同细胞株细胞凋亡的IC50值，实验组与对照组再进行流式细胞学对比检测分析，进而得出对索拉菲尼相对敏感及不敏感肝癌细胞株。结果索拉菲尼对六种人肝癌细胞株PLC、HepG2・2・15、Huh7、H
2、epG2、MHCC97H.SMCC7721均有明显的促凋亡作用，对它们作用的IC50值分别为5.3umol/L、5.3umol/L、6.8umol/L、7.Oumol/L^11.7umol/Ls15.0umol/Lo结论索拉菲尼对人肝癌细胞株Huh7、MHCC97H.HepG2、SMCC7721.HepG2.2.15、PLC均有明显的抑制增殖和促凋亡作用，其作用相对敏感细胞株和不敏感细胞株分别为PLC和SMCC7721o关键词：索拉菲尼；肝癌；细胞株；凋亡索拉菲尼(Sorafenib,商品名：多吉美)是一
3、个多靶点的分子靶向药物，对Raf-1激酶，VEGFR2、3,FLT3,Ret、C-kit,PDGFR等靶点有抑制作用［1〜3］。目前已有多项研究证明索拉菲尼对晩期原发性肝细胞癌(HCC)有明显、确切的疗效，能明显延长晚期肝癌的生存时间［4〜6］。但在针对索拉菲尼对不同人肝癌细胞株的各项实验研究结果中，其对不同细胞株的作用效果存在差异［4,7］。本研究以肝癌细胞株Huh7、MHCC97H.HepG2、SMCC7721、HepG2.2.15、PLC为研究对象，通过实验得出它们不同的IC50值，并且选出对索拉菲
4、尼相对敏感及不敏感细胞株，为将来相关实验研究的细胞株选择提供参考。1资料与方法1.1-般资料人肝癌细胞株Huh7、HepG2、SMCC7721.PLC（中国科学院上海细胞库），HepG2.2.15购自上海复祥生物科技有限公司，MHCC-97H（上海中山医院肝癌研究所），CCK8试剂盒（美国Sigma公司），Annexin-PE/7-A凋亡检测试剂盒（美国Becton&Dickinson公司），索拉菲尼（德国拜耳免费提供）。1.2方法1.2.1细胞准备将各ITCC细胞株接种在含10%小牛血清，1%青霉素、链
5、霉素的DMEM培养基中，放置于37°C.5%C02培养箱中培养，细胞生长良好呈单层贴壁生长，将于对数生长期的各株细胞计数并制成细胞悬液，，低倍显微镜下逐一计数4大格的细胞数。计数板上每大格含16小格，计数时每小格在上、左的压线细胞计入，而压线于下、右的细胞排除不计。计数完成后按细胞密度公式计算：细胞悬液的细胞数/ml二（四个大格子细胞数/4）X104o反复操作细胞计数3次取平均值以确保结果准确。每种细胞株设对照组（细胞悬液+DMSO）、实验组（细胞悬液+索拉菲尼）。1.2.2流式细胞学检测将浓度为2X10
6、5/ml呈指数生长的细胞悬液接种于6孔板，每孔2.5ml（即5X105/孔），细胞培养箱内孵育Id,对照组每孔加入0.5mlDMSO,实验组每孔加入索拉菲尼0.5ml溶液（终浓度为4uM）,每组设三个复孔，然后置培养箱内孵育3d,不含EDTA的胰酶消化收集、离心细胞，PBS液洗涤2次（每次均以2000rpm离心5min）,以500ul的BindingBuffer重悬细胞，先后加入5ulAnnexinV-FITC和5ulPropidiumIodide,混匀,室温避光反应lOmin,在lh内上流式细胞仪检测记
7、录结果。流式细胞仪参数设定:激发波长Ex=488nm,发射波长Em=530nm；AnnexinV-FITC的绿色荧光和PI红色荧光分别通过FL1和FL3通道检测。1.2.3CCK8法检测每种细胞设空白组（培养液+CCK—8）、对照组（细胞+培养液+CCK-8）、实验组（细胞+培养液+索拉菲尼+CCK-8）o调整细胞悬液浓度为5X107/L,96孔板中每种细胞各组设4个不同索拉菲尼作用浓度，每个浓度设3个复孔，对照组内加入培养液200ul,实验组内加入不同量的索拉菲尼溶液，余量液体用培养液补足，使每孔液体量
8、为200ul,在细胞培养箱内孵育24h；各组每孔加入lOulCCK-8溶液，放入细胞培养箱内孵育2h。酶标仪在450nm波长比色测定每孔吸光度（A）值，记录结果。细胞存活率（％）二[（Aa-Ab）/（Ac-Ab）]X100%,Aa：实验孔，Ab：空白孔，Ac：对照孔。IC50值为细胞存活率为50%时的索拉菲尼浓度。1.3统计学处理所有数据采用SPSS13.0软件分析。流式细胞、CCK-8复孔结果都以（x±s）表示，不同实验方法
