凋亡抑制基因survivin与稽留流产发病机制的相关性研究

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1、凋亡抑制基因survivin与稽留流产发病机制的相关性研究【摘要】目的研究凋亡抑制基因survivin令c稽留流产发病机制的相关性。方法30例稽留流产排除胚胎染色体异常者为研宄组，正常早孕要求行人工流产患者30例为对照组。根据免疫组化结果分析survivin在稽留流产及正常早孕患者绒毛、蜕膜survivin表达情况以及两组患者细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞中survivin阳性表达情况。结果survivin主要在细胞滋养层细胞、部分容貌间质细胞、脱膜细胞等位置，呈核/浆表达，在子宫内膜腺体中也较为常见,呈胞浆阳性状态。研宄组患者绒毛survivin表达为，

2、蜕膜survivin表达为，均显著高于对照组患者，差异具有统计学意义。在细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞中，研究组患者survivin阳性表达分别为％和％，均低于对照组患者，差异具有统计学意义。结论在稽留流产发病机制中，凋亡抑制基因survivin具有较大的相关性。【关键词】凋亡抑制基因survivin；稽留流产；发病机制；相关性研究DOI：10.14163/j.cnki.1l-5547/r.2017.18.035稽留流产也叫做过期流产，指的是胎儿或胚胎死亡后，在宫内未及时排出。近年来，稽留流产的发病几率整逐渐上升，对孕产妇的身心健康、家庭稳定等，都造成了不

3、良的影响。目前，对于稽留流产的具体发病机制尚未完全清除，相关研究认为，稽留流产的发病，可能与凋亡抑制基因survivin存在一定的关系。基于此，本文选择稽留流产排除胚胎染色体异常者30例及正常早孕要求行人工流产患者30例作为研究对象，研究了凋亡抑制基因survivin与稽留流产发病机制的相关性问题。现报告如下。1资料与方法1.1一般资料选取2015年1月〜2016年12月稽留流产排除胚胎染色体异常者30例作为研宄组，停经时间6〜10周，平均时间周，年龄20〜35岁，平均年龄岁，尿人绒毛膜促性腺激素呈阳性，B超检查无胎心搏动，根据妇产科学标准进行检查，诊断患

4、者均为稽留流产患者。选择同期正常早孕要求行人工流产患者30例作为对照组，停经时间6〜10周，平均时间周，年龄21〜37岁，平均年龄岁，尿HCG呈阳性，B超显示有胎心搏动。两组患者一般资料比较差异无统计学意义，具有可比性。1.2方法稽留流产患者排胎后及正常早孕者行人工流产后，分别选取绒毛组织各分成3小份，注意避开出血、坏死及钙化部位。1份置于4%多聚甲醛中保存固定，待制备石蜡切片行免疫组化检查，其余2份用以后续实验的mRNA及westernblot检测。采用免疫组化法观察survivin在两组患者绒毛滋养细胞上的表达，首先进行石蜡包埋，常规HE染色，石蜡切片

5、依次二甲苯、梯度酒精脱蜡至水，置于拧檬酸盐缓冲液中放于微波炉，中火煮沸15min,待其自然冷却后，将切片取出，以0.1M的磷酸盐缓冲液洗2minx3次［1］。加3%过氧化氢，封闭内源性过氧化物酶，室温lOmin，0.1M的PBS洗2minx3次。滴加一抗小鼠抗人单克隆抗体4°C，过夜。室温复温40min,0.1M的PBS洗2minx3次。滴加聚合物辅助剂，室温20min,0.1M的PBS洗2minx3次。滴加辣根酶标记羊抗兔/小鼠免疫球蛋白G多聚体，室温30min,0.1M的PBS洗2minx3次。DAB显色，镜下控制显色时间，自来水洗涤中止显色。苏木素复

6、染，以盐酸酒精分化。梯度酒精脱水、二甲苯透明，封片［2］。采用实时荧光定量PCR检测两组患者绒毛组织内survivinmRNA的表达水平，总RNA提取，去基因组，RNA纯度及完整性检测，逆转录，30°C保温lOmin，42°C保温60min，72°C保温10min。定量PCR,应用相对定量比较CT值法分析PCR结果［3］。采用Westernblot检测两组患者绒毛组织内survivin蛋白的表达水平，绒毛组织内细胞总蛋白提取及定孵育一抗及孵育二抗，采用化学发光法显影，应用Bio-RadQuantityOne软件对蛋白条带进行定量分析［4］。1.3观察指标观

7、察survivin分布情况；根据免疫组化结果分析survivin在稽留流产及正常早孕患者绒毛、蜕膜survivin表达情况以及两组患者细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞中survivin阳性表达情况。1.4统计学方法采用SPSS16.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差表示，采用t检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。2结果survivin主要在细胞滋养层细胞、部分容貌间质细胞、蜕膜细胞等位置，呈核/浆表达，在子宫内膜腺体中也较为常见，呈胞浆阳性状态。研究组患者绒毛survivin表达为，蜕膜survivin表达为，均显著高于对照组患者，差异具

8、有统计学意义。在细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞中，研宄组患者sur