利用rnai水稻化感作用关键酶pal基因的功能

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1、独创性声明本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是本人在指导教师的指导下独立完成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中己作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。学位(毕业)论文作者亲笔签名：代J，有日期．D岳。0／．心论文使用授权的说明本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；

2、学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密，在年后解密可适用本授权书。口不保密，本论文属于不保密。囵学位(毕业)论文作者亲笔签名：代JI茵日期：D分。。‘．心指导教师亲笔签名：戈渺日期：醑靠州摘要为证实水稻化感作用的功能性状与PAL基因功能之间的相关性，揭示水稻化感作用的分子生态学过程与机制，以强化感水稻品种P1312777为材料，从化感水稻P1312777植株中提取基因组DNA，根据GenBank中PAL基因的保守序列，设计合成RNAi引物，PCR扩增出PAL基因片段并克

3、隆到pMD-18Teasy载体，测序确定其正确性，获得PAL基因320bp序列。再将PAL基因片段(320bp)正反向连接于载体PTCK一303内含子两端，构建成RNAi表达载体PTCK303-S-A，通过根癌农杆菌介导转化水稻，对水稻进行GUS染色，PCR检测，证明外源基因已经成功整合到水稻基因组中，获得转基因水稻。荧光定量PCR检测结果：转基因正常氮与低氮PI叶组织中的PAL基因表达量是对照未转基因正常氮，低氮PI叶组织中PAL基因表达量的70％与75％，转基因正常氮与低氮PI叶组织中的PAL基因干扰效率分

4、别为30％与25％。与对照未转基因正常氮下相比，对照未转基因低氮下PI叶组织中的PAL基因上调表达2．12倍。转基因低氮P工叶组织的PAL基因也上调表达，与转基因正常氮下相比上调2．32倍。PAL酶活性检测结果：转基因正常氮PI水稻PAL酶活性下调，与未转基因正常氮P工水稻PAL酶活性相比降1氐64％，说明PAL基因被干扰。在不同氮素条件下水稻抑草潜力的变化结果：在源于转基因P1312777正常氮处理液中培养的稗草，其稗草干物重均大于未转基因P1312777、Lemont正常氮处理液培养的稗草的对应值，其抑制率

5、则小于其对应值，在源于转基因P1312777低氮处理液中培养的稗草，其稗草干物重均大于未转基因P1312777、Lemont低氮处理液培养的稗草的对应值，其抑制率则小于其对应值，证实水稻化感作用的功能性状与PAL基因的功能相关。关键词：PAL基因；RNAi；GUS染色；荧光定量PCR；PAL酶活性；抑草潜力AbstractA1lelopathicriceP1312777wasusedasexperimentmaterialtoprovefunctionalpropertiesofallelopathyinric

6、eassociatedwithfunctionofPALgene，andtorevealtheprocessandmechanismofmolecularecologyinriceallelopathy．ThegenomeDNAwasextractedfromleavesofallelopathicriceP1312777．Afragmentwasproducedbypolymerasechainreactionusingthespecificprimersdesignedontheconservativese

7、quenceofPALgeneinGenBank．TheamplifiedfragmentwasclonedtopMD一18Teasyvector．anditwasverifiedbysequencing．ADNAfragmentwiththelengthof320bpofPALgenewasobtained．ToconstructRNAiexpressionvector，PTCK303一S—A，twocopiesofthe320bpfragmentwerefurtherinsertedintoaexpress

8、ionvector，PTCK303，inaninverted——repeatorientationatbothendsofintron．ThevectorwastransferredintoricebyAgrobacteriumtumefaciens—mediatedmethod．ThegenefragmenthadbeenintegratedintogenomicDNAofP1312