egfr基因家族shrna真核表达载体构建及其对skov 3细胞的影响

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1、优秀毕业论文重庆医科大学硕士研究生学位论文—————————————————————————————————————————————————————————一一英汉缩略语名词对照英文缩写英文全称中文全称BpBasepair碱基对Rpmrotationperminute转每分钟dsRNADoublestrandRNA双链I酬ARNAiRNAinterferingRNA干扰RNaseRibonucleaseRNA酶SiRNAShortinterferingRNA小片段干扰RNAKanaKanamycin卡那霉素KbKilobasepair千碱基对LBLuria—bertan

2、imediumLB培养基ntNucleotide核昔酸RdRpRNA·dependentRNApolymeriseRNA依赖的RNA聚合酶dsRNADoublestrandRNA。双链RNARISCRNAiinducingsilencecomplexRNA诱导的沉默复合物shRNAsmallhairpinRNA小发卡RNAEGFREpidermalgrowthfactorreceptor表皮生长因子受体Abantibody抗体DMSOdimethylsulfoxide二甲亚砜EDTAethlyenediminotetraceticacid乙二胺四乙酸MTT3一(4，5-

3、diphenylthiaz01．Z．y1)．2，5．四甲基偶氮唑盐DiphenyltetrazoliumMAPKmitogenactivatedproteinkinase分裂原激活的蛋白激酶ODopticaldensity光密度RT-PCRreversetranscriptasePCR反转录酶PCRTPKtyrosineproteinkinase酪氨酸蛋白激酶精品参考文献资料优秀毕业论文重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写

4、过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意．申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。杉1，学位论文作者虢熟童§二日{9j=丝塑：兰鲞学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即．o研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学．本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学．学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部

5、分内容(保密内容除外)，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。圯71、论文作者签名：匆、屯1、指导教师签名：日期：堡二兰二!量精品参考文献资料优秀毕业论文重庆医科大学硕士研究生学位论文EGFR基因家族shRNA真核表达载体构建及其对SKOV3细胞的影响摘要第一部分：EFGR基因家族shRNA真核表达质粒的构建目的：构建针对EGFR家族的shRNA干扰质粒表达载体，为本课题下一步研究提供有力工具。方法：选择放疗不敏感的卵巢癌细胞SKOV3中高表达的EGFR家族同源性基因为靶基因，根据shRNA的设计原则，设计实验组及对照组shRNA。体外合成2段编码短发夹RNA序列的DN

6、A单链，退火，克隆到相应载体pGensil一1的polIlI启动子下游。分别命名为pGensil．1一E及pGensil—l—C。经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定。结果：经酶切和DNA测序鉴定结果完全符合设计要求，成功构建了EGFR家族同源性基因的RNA干扰表达载体，pGensil-l-E及pGensil．1．C。为下一步体外、体内实验奠定了基础。结论：本实验应用RNAi技术，成功构建了EGFR家族同源性基因的RNA干扰表达载体，pGensil．1．E及pGensil一1一C。精品参考文献资料优秀毕业论文重庆医科大学硕士研究生学位论文第二部分RNA干扰EGFR家族

7、对人卵巢癌SKOV3细胞增殖活性的影响目的：将重组质粒载体转染卵巢癌SKOV3细胞，观察其对SKOV3增殖活性的影响。方法：利用脂质体2000转染细胞，G418筛选建立稳定转染细胞系。利用MTT检测细胞增殖活性。利用I弭PCR、WesternBlot检测稳定细胞mRNA、蛋白水平变化。结果：建立了RNA干扰重组质粒载体稳定转染SKOV3细胞。MTT：pGensil—l-E组较对照组细胞增殖抑制率24h、48h、72h分别为：59．7％、81．2％、87．8％。RT．PCR：pGensil一1．E组较对照组细胞瞬时转染及稳定转染HER2mR