hif1α对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：参守导师签名：声锄学院领导签名：矿g年；月岁f日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或

2、撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：接宁翩虢蝴矿g年≥月易7日中文摘要F-1Q对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制摘要目的：肝细胞肝癌(humanhepatocellularcarcinomaHCC)是我国最常见的恶性肿瘤之一，恶性程度高，易侵袭转移，预后差，因而探索肝细胞癌的发病及侵袭转移机制是临床研究的一大挑战。肝癌生长速度快，造成局部组织严重缺氧，缺氧状况下中肿瘤仍能不断增殖，浸润，极易侵袭转移和复发，这也是肝癌研究的重点及临床治疗的难点，但肝癌侵袭转移的机制尚不清楚。此过程中起关键作用的是缺氧诱导因子．1(hypoxi

3、ainduciblefactor-1HIF—1)。HIF一1是迄今为止发现的唯一一个特异性缺氧状态下发挥活性的转录因子。HIF一1Q在肿瘤组织中广泛表达，对维持肿瘤细胞的能量代谢、肿瘤血管生成、促进肿瘤细胞增殖和转移起重要作用。本研究通过应用HIF一1Q抑制剂YC一1和HIF．1Q的反义寡核苷酸分别处理SMMC一7721肝癌细胞，观察不同药物浓度对肝癌细胞增殖的作用和对SMMC一7721细胞周期及凋亡率的影响，榆洲bcl一2，bax，survivinmRNA和蛋白表达量的变化，明确缺氧诱导因子一1对肝癌细胞周期和增殖调亡影响及可能机制，为明确肝癌侵袭转移的机制及采取相

4、应的治疗措施提供理论依据。方法：肝癌细胞系SMMC一7721分对照组和试验组。对照组细胞常规培养，试验组细胞分别施加HIF—la抑制中文摘要剂YC一1和HIF一1Q的反义寡核：f1：酸干预，设浓度梯度和时间梯度。MrT方法检测不同药物浓度对SMMC一7721细胞的增殖的作用；采用FCM检测不同时间点、不同药物浓度对SMMC一7721细胞周期和凋亡率的影响；采用逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)技术，测定细胞bcl一2，bax，survivinmRNA表达的变化，以D．actin作为内参照标准，通过凝胶扫描仪对扩增产物进行DNA电泳条带的光密度值分析，将bcl一2，

5、bax，survivin与$一actin比值作为bcl一2，bax，survivinm11NA表达水平的参数，对bcl一2，bax，survivin产物相对定量；以Westernblot方法检测SMMC一7721细胞胞浆bcl一2，bax，survivin蛋白表达的变化，同样以13一actin作为内参照标准，对bcl．2，bax，survivin蛋白进行相对定量分析。所有数据均以i±S表示，采用SPSS13．0统计分析软件进行方差分析(GLM过程)检验，P<0．05为有显著差异。结果1MTT比色法显示：1．1YC—l对SMMC一772l细胞增殖具有抑制作用。不同浓度Y

6、C一1处理细胞后，与对照组相比，各处理组OD值均有显著下降，差异具有显著性(P<0．05)。各实验组间比较，差异亦具有显著性(P

7、度ASODN处理细胞后，与对照组相比，各处理组OD值均有显著下降，差异具有显著性(P<0．05)。各实验组间比较，差异亦具有显著性(P<0．05)。HIF一1a的ASODN处理细胞不同时间后，与对照组相比，各处理组OD值均有显著下降，差异具有显著性(P<0．05)。各实验组间比较，差异亦具有显著性(P<0．05)。随ASODN处理浓度的增大、作用时间的延长，OD值显著下降，即ASODN对SMMC一7721细胞的增殖抑制作用呈明显的时间一剂量依赖效应(Fig．3，Table2’)(P<0．05)。2流式细胞仪检测细胞周期分布显示：2．1不同浓度YC一1