浅谈抗hbv核酶的研究进展

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果浅谈抗HBV核酶的研究进展【关键词】乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒是引起乙型肝炎的病原体。在我国HBV感染率达10%，而传统的抗病毒药物远期疗效均不显著，寻找新型抗HBV药物成为迫切需要。核酶是一类具有生物催化功能的RNA，可定点切割RNA靶分子，从而达到有效阻断基因表达的目的［1］。通过合理的设计及操作，核酶可阻断HBV的复制及表达。所以在基因治疗领域倍受重视。1核酶的类

2、型及设计到目前为止，人们发现的核酶共有六种类型。即Ⅰ类内含子、RNaseP、锤头状核酶、发夹状核酶、丁型肝炎核酶和VS核酶。通过对这六类核酶组成及结构的研究，人们已经开始利用锤头状、发夹状核酶的特点，人工合成所需要的核酶。WEizsacker［2］、竺来发［3］等人所设计针对HBV的核酶，均采用这种传统方式。Hselh等则就HDV核酶研究对乙型肝炎病毒的阻断作用。对于核酶的合成，有两种方法：是用DNA/RNA合成仪直接合成；先合成核酶的双链或单链模板，然后用T4DNA连接酶将其整合并克隆至合适的表达

3、载体，让其表达出核酶。这是一种简单、实用的方法。通过对这些核酶的深入研究，有助于有效控制HBV的感染。课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果提高核酶的稳定性由于血清和细胞内含有大量的核酸酶，体内表达核酶存在被降解的可能。因此目前大多数研究致力于提高体外合成核酶的稳定性修饰，也有关于体内表达核酶的

4、稳定性的研究报道。在体外许多研究针对2’-OH进行修饰，以增加核酶的稳定性。如Taylor设计的DNA-RNA杂合核酶，即与底物配部分用脱氧核苷酸替代。结果其体外活性提高6倍，稳定性提高2倍。HEIdenreich则以2’-氟替代，发现提高了稳定性但也降低了剪切活性。亦有以2’-甲基，2’-脱氨，2’-氨基，磷硫替代等修饰的报道。核酶在细胞内提高稳定性则通过装在tRNA反密码环或在核酶末端引入茎环结构来进行。连建奇在核酶两端设计顺式核酶也是一种有效的方法。提高抗病毒效率的方法体外进化目前用的核酶，均

5、为人工设计，但即使合理设计的核酶，催化效率也低于天然核酶。根据RNA分子进行技术提出进行体外筛选方法，在抗HIV中已有报道，对抗HBV也是一种可行的方法。多位点核酶的联合作用，针对这种思路，如WEizsacker所用三个核酶的串联作用。与定向技术相结合，如用HBV外膜蛋白包装含有HDV核酶的弱毒株，可使其定向作用于靶器官肝脏。日本学者山田修平设计抗HCV的核酶时，使用唾液粘蛋白定向等等。课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从

6、本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果目前的研究现状抗HBV核酶的研究是核酶应用研究的一个热点。竺来发等人设计针对HBcAgmRNA编码序列的核酶。在Mg++存在下，将137nt的核酸准确地水解得到97nt和40nt两个片段，可有效地剪切HBV的mRNA。王平等人针对HBV的前c/c基因设计了锤头状核酶，经体外转录后可定点切割靶RNA。同时在HepG2细胞中亦可显著抑制HBeAg、HBsAg的表达。WEIz

7、sacker构建了串联的核酶，分别针对HBV2029、2044、2049位点，结果表明三个核酶同时具有剪切作用，Beck设计也针对HBV包装点的锤头状核酶，体外剪切靶RNA，用U6snRNA表达核酶与HBV共转染，也可有将效切割RNA。Hsieh则将丁型肝炎核酶改造，利用外膜为HBsAg的特点。可将抗HBV的核酶靶向导入肝细胞中，为乙型肝炎治疗提供了一条新途径。Welch使用三个发夹状核酶，在Huh7细胞中与HBV共表达，使其表达下降66%，对核酶修饰后，则抑制率达83%。真核细胞表达的成功，预示对

8、HBV基因治疗是可行的。存在问题及展望抗HBV核酶的体外、体内的应用研究已取得了很大进展，但目前还有诸多问题尚待解决，如怎样选择敏感的靶位点，如何使核酶进入细胞，如何提高核酶的稳定性等。但就技术本身的发展潜力巨大。从已经进行的抗HIV核酶Ⅰ期临床实验中，我们已经看到了抗HBV核酶发展的曙光。课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课