水产品中替米考星残留分析方法探讨

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1、水产品中替米考星残留分析方法的探讨摘要：替米考星是一种新的半合成大环内酯类抗生素，在水产养殖中主要用于预防传染疾病或在饲料中作促生长剂。但过量或不按停药期的规定使用会造成残留，对人类健康造成威胁。本文通过对多种检测方法的比较，初步认为液相色谱串联质谱(LC・M)法是适合的方法。同时结合相关研究成果和作者的实际工作，从前处理(包括提取和净化)和检测条件的选择两个方面对水产品中替米考星的残留分析方法进行探讨，替米考星；水产品；残留分析；液相色谱串联质谱替米考星(Tilmicosin)是半合成大环内酯类备禽专用抗生素，具有很强的抗菌活性，对所有的革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌、很形休、螺

2、旋体等均有抑制作用，尤其是对多种支原体及螺旋体也具有很强的抑制作用⑴，在水产养殖屮主要川于预防传染疾病或在饲料屮用作促牛长剂。替米考星，分了式为：C46H8oN20I3(其结构式见图1),为无色弱碱性化合物，易溶于酸性水溶液和甲醇、乙膳、乙酸乙酯、氯仿、乙瞇等极性溶剂，在饱和碳氢溶剂和水屮微溶,在干燥状态卜湘当稳定，在pH6〜8的水溶液屮相对较稳定，但在酸性条件F(pH<4时)甘键易发生水解。O图1替米考星结构式欧盟和口本等明确规定水产品肌肉中替米考星的最大残留虽为5Opg/kgo冃前中国只规定畜禽产品中的替米考星的限量标准，但在水产品中并没冇规定其限量，也没冇相应的检测方法。中国

3、作为水产品生产及出口贸易大国，如不能很好地控制替米考星的残留，不但对人类健康构成严重威胁，还会给水产品的出口贸易造成不必要的困难。因此开展对水产品中替米考星的残留检测，对促进水产品出口和保证动物源性食品安全有积极的意义。1几种检测方法比较H前，用丁检测替米考星的检测方法有薄层色谱法、核磁共振法、液相色谱法和液相色谱串联质谱法，但这几种方法各有优缺点。1.1薄层色谱法(TLC)法TLC法是用薄层板将样品提取液屮被测物展开分离示，测定样品与标准样品吸收光或采用发射光薄层扫描法测定。在2000版的《中国药典》中，所有相关大环内酯类抗生素物质的检测都使用该法。但在水产品中替米考星的检测上，

4、TLC法有明显的缺点：TLC影响因索较多，分离能力较差，检测灵敏度较低，不适于药物的微量检测。1.2核磁共振(NMR)法NMR法是一•种基于特定原子核在外磁场屮吸收了与其裂分能级间能最羌相对应的射频场能量而产生共振现象的分析方法。王强等⑵用BrukerAvance300超导核磁共振波谱仪、QNP探头，在测定温度(探头温度)室温25°C,环境相对湿度30%,脉冲宽度pl=8s,脉冲延迟时间dl=8s,扫描次数ns=32下，用核磁共振方法对替米考星样品进行定量测定，线性实验测得线性回归系数为0.9985,重复性实验测得RSD为0.327%。NMR法分析替米考星的缺点是对样品纯度要求较高

5、，只能用在该药品的分析方血。另外，该法灵敏度比较低,一•般要用mg以上的试样作测试，很少作定性分析。定最分析精确度、准确度也较差。1.3高效液相色谱(HPLC)法HPLC法作为现代分析技术的重要手段之一，目而已成为大多数大环内酯类抗生素残留的分析方法。张素梅等⑶建立替米考星残留的HPLC检测方法。样甜用磷酸二氛钾和乙睛提取，SPE柱净化，选取乙悄-四氢咲喃-磷酸二丁胺-水为流动相，色谱柱色谱柱为AgilentEclipseXDB-Cl8反相色谱柱柱，在290nm波长下进行测定。替米考星在0.02〜2.0卩g/g添加范围内，平均回收率为78.90%〜85.17%。张旭东等⑷在流动相为

6、水-己睛-四氮咲喃-磷酸丁胺缓冲液，色谱柱为ODS柱的条件下，对替米考星进行分析。最低检测限为1.7昭，方法的回收率在99%〜101%,相对标准偏差(RSD)小于0.5%oHPLC法实现了分离速度快，效率高和操作自动化。但该方法所用的流动相复杂，不易学握配比，而R检测替米考星时定性不够准确，容易受到杂峰的干扰。同时，由于某些人环内酯类抗生素在分了屮缺乏特征紫外吸收，如果使用普通的紫外检测器，山于含量较低，HPLC法将失去灵敏度的优势，因此该法不适于多种药物的同时检测。1.4液相色谱串联质谱(LC-MS)法LC-MS法是确证检测类似替米考星这样较高分了量和多官能团残留物的较理想方法。

7、该法具冇较高的灵敏度和选择性，对LC分离度要求不高。特别是基于大气压电喷雾电离接口技术的LC-ESI-MS能获得较强的替米考星分子离子峰，适宜在SIM(选择离子监测)模式下进行高灵敏度检测。MasakazuHorie等⑸采川LcESIMS法测定肉和鱼中的替米考星残留。费物用0.2%偏磷酸■卬醇(6:4,v/v)提取，OasisHLB固相萃取柱净化。LC分离用TSK-gelSuperODS柱,流动相为0.2%酷酸-乙腊。该方法在加标0.2pg/g时，样品回收率为70.1