植物细胞悬浮培养1

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1、细胞培养基础知识已有288次阅读2011-5-2422:41

2、系统分类:科研笔记

3、关键词:细胞培养液微生物细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件Z—，培养基不仅捉供细胞营养和促使细胞牛长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。血清是细胞培养液中最重耍的成分Z一，含冇细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体外培养的细胞出于缺乏对微生物和冇毒物的防御能力，一旦被微生物或冇

4、每物质污染，或者口身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件z—,所需气体主要有氧气和二氧化碳。细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。干粉培养基需曲实验者自己配制并灭菌，液体培养基出专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。1、合成培养基的主要成分冇：氨基酸、碳

5、水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸是组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但冇几种氨基酸细胞口身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。英屮谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞主长不良而死亡。因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。但是，由于谷氨酰胺在溶液屮很不稳定，应置于-20°C冰箱屮保存，在使用前加入培养液内。已含谷氨酰胺的培养液在4°C冰箱中储存2周以上时，还应重新加入原來量的谷氨酰胺。碳水化合物碳水化合物是细胞牛长主要能量来源，其中有的是合成蛋口质和核酸的成分。主要有葡萄糖、核

6、糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。无机盐培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平術。此外，通过提供钠，钾和钙离子，帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是一个非常重要的因素，细胞通常可耐受260m0sm/kg〜320mOsm/kgo标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意：向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压，特别是溶于强酸或强碱屮的物质。向培养液屮添加HEPES吋需按以下方法调节钠离子浓度。缓冲系统大多数细胞所需pll在7.2-7.4。但是，细胞培养最适pll值随培养的细胞种类不同而不同。成纤维细胞喜欢较高pH(7.4-7.7),

7、fij传代转化

8、细胞系则需要偏酸pH(7.0-7.4)o由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHC03)与C02体系进行缓冲，因此，气相屮的C02浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。如果气相或培养箱空气中C02浓度设定在5%,培养液中NaIIC03的加入量为1.97g/L；如果C02浓度维持在10%，培养液中NaHC03的加入量为3.95g/Lo细胞培养瓶盖不应拧得太紧，以保证气体交换。HEPES是一种非离子缓冲液，在pH7.2-7.4范围内具有较好的缓冲能力，但是非常昂贵，在高浓度吋对一些细胞可能有毒。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g/L)共用,以抵消因额外加入IIEPES引起

9、的渗透压增加。在这种培养条件卜，细胞培养瓶的盖了应拧紧，以防止培养液屮所需的少量碳酸盐散入空气屮。大多数培养液屮含冇酚红作为pH指示剂，酸性培养液呈橙黄色，碱性培养液呈深红色。维生素在细胞培养中，尽管血清是维生索重要來源，但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。其它成分在一些较为复杂的培养液中还包描其它一些成分。如在杂交瘤技术中常用的DMEM培养液，使用吋还需要补加内酮酸钠和2-毓基乙醇(2-Mercaptoethanol,2-Me)o2-Me对细胞生长有很重要的作用。有人认为它相当于胎牛血清，有直接刺激细胞增殖作用。2-Mc的活性部分是硫氢基，其中一个

10、重要作用是使血清屮含硫的化合物述原成谷胱甘肽，能诱导细胞的增殖，为非特异性的激活作用。同时避免过氧化物对培养细胞的损害。另一个重要作用是促进分裂原的反应和DNA合成，增加植物凝集素(PHA)对淋巴细胞的转化作用，已广泛应用于杂交瘤技术，另外，也开始用于一些难以培养的细胞。2-Me是一种小分子还原剂，极易氧化。分了量为78.13,纯的2-Mc是一种无色有刺激味的液体，比重为1.110-1.120(Do20),常用终浓度为5X10-5Mo常配制成0.1M的储存液，用时每升培养液加0.5ml。液体培养基保存：液体培养基应于4°C冰箱避光保存，实