一株野生侧耳属菌株的分离鉴定与生物学特性

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1、一株野生侧耳属菌株的分离鉴定与生物学特性　　摘要：采用组织分离的方法从野生侧耳属菌株（Pleurotussp.）子实体上分离得到菌株XZG-ts，以其基因组为模板扩增获得该菌株的ITS序列，序列分析结果表明，菌株XZG-ts与GenBank中来自于澳大利亚、印度和中国云南的3个肺形侧耳菌株聚为一簇，组内核苷酸一致率为100%，而与侧耳属其他4个种的10个菌株核苷酸一致率为98.10%～99.06%，依此结果将XZG-ts菌株鉴定为P.pulmonarius。进一步研究了不同碳源、氮源、碳氮组合、温度及pH值对菌株XZG-ts菌丝生长的影响，

2、结果表明，最适碳源为果糖，氮源为酵母膏，最佳碳氮源组合为果糖1%、麦芽糖1.0%、酵母膏0.2%、蛋白胨0.3%，最适生长温度为25℃，最适pH值为6。　　关键词：侧耳属菌株；ITS序列分析；生物学特性；肺形侧耳　　中图分类号：S646.9文献标识号：A文章编号：1001-4942（2016）12-0091-04　　AbstractAfungistrain，XZG-ts，collectedfromtheMountainTai，wasisolatedbytissueisolationandtheinternaltranscribedspace

3、rs（ITS）wasamplifiedbyPCR.InthephylogenetictreeconstructedwithITS，XZG-tsformedabranchwith3isolatesbelongingtoPleurotuspulmonariusfromAustralian，IndiaandChinawiththeconsistentrateof100%inintra-groupnucleotide.8Whileitwasonly98.10%～99.06%withother10isolatesofPleurotus.Therefo

4、reXZG-tswasidentifiedasP.pulmonarius.Theeffectsofcarbonsource，nitrogensource，carbon-nitrogencombinationandpHvalueonthegrowthofmyceliumwerefurtherstudied.Theresultsshowedtheoptimumcarbonsource，nitrogensource，temperatureandpHvaluewasfructose，yeastextract，25℃and6，respectively

5、.Andtheoptimumcarbon-nitrogencombinationwas1%fructose，1.0%maltose，0.2%yeastextract，0.3%peptone.　　KeywordsPleurotussp.；ITSsequenceanalysis；Biologicalcharacteristic；Pleurotuspulmonarius　　侧耳属[Pleurotus（Fr.）P.Kumm.]是与人类关系密切的重要经济真菌，世界广泛存在20种[1]，对木质纤维素的转化以及环境修复作用倍受关注[2]。近200年来，侧

6、耳属描述的分类单元超过1000个[3]，主要原因是子实体形态受环境条件影响大，按照形态特征分类导致较多的同物异名或同名异物。我国侧耳属真菌野生资源丰富，分布范围也极其广泛。本研究从泰山分离获得一株野生侧耳属菌株，对其进行鉴定，并研究明确了该菌株菌丝体最适培养条件，为产业发展和教学科研提供了新的种质资源，同时为进一步开发利用奠定基础。　　1材料与方法　　1.1供试菌株　　将采自泰山的野生侧耳属菌株参照文献[4]进行组织分离、纯化，标为XZG-ts。8　　1.2主要试剂　　真菌总DNA提取试剂盒（E.Z.N.A.FungalDNAKit），购自

7、北京全式金公司；PCR所用试剂，均为大连宝生物公司产品；常规试剂，为进口分装或国产分析纯试剂。　　1.3菌株的分子鉴定　　1.3.1菌丝体制备及DNA提取将保存的母种切取5mm2小块，接种于PDA加富平板培养基中央，25℃黑暗培养5～7d，待菌丝生长到接近平板边缘，刮取菌落边缘的新鲜菌丝，利用真菌总DNA提取试剂盒提取基因组总DNA。　　1.3.2ITS扩增参照文献[5]所报道的用于真菌ITS区域扩增的通用引物ITS1/ITS4进行PCR扩增。PCR反应体系和程序参照文献[4]。　　1.3.3序列分析PCR结束后，取PCR产物4μL进行琼脂

8、糖凝胶电泳，检测扩增结果，将有目的条带的PCR产物送北京博尚生物公司测序；将所得DNA序列输入GenBank进行Blast检索，采用Clustalx1.81、DNASTAR、DN