prrsv+ade途径感染对猪肺泡巨噬细胞tnfα的表达调控

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1、PRRSVADE途径感染对猪肺泡巨噬细胞TNF吨的表达调控研究生：冯丽丽导师：张改平研究员中文摘要猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)可引起母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道疾病。PRRSV在世界范围内流行，造成巨大的经济损火。抗体依赖的感染增强作用(ADE)是PRRSV的一个重要免疫学特征，同时也是PRRS防控中遇到的最大难题之一。PRRSV具有严格的细胞专嗜性，主要通过受体介导的胞吞作用感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)。TNF．a主要是由巨噬细胞产生的一种具有促炎活性和免疫调节作刚的单核冈子。核转录因子(NF．1cB)，作

2、为信号转导途径中的枢纽，能够调节TNF．a等基因表达。NF．r,B活化时，从胞浆易位到胞核，DNA结合活性提高，上调TNF．a等目标基冈的转录。IKKp是I．1(B激酶的主要活性单位，参与NF．r．B的活化过程。本研究用PRRSVBJ．4株经ADE途径体外感染PAM，分析了TNF．a、NF．r,B及lKKp的表达变化，探索PRRSV感染对猪肺泡巨噬细胞TNF．。‘的表达调控。分离培养PAM，采用标准的ADE测定方法确定PRRSVBJ．4株产生ADE的条件。用104TCID50的PRRSV与等体积的10倍稀释后再以

3、2的指数倍(2d～2{)稀释的阳性血清的混合物接种PAM，48h后收获病毒，用Marc．145细胞测定子代病毒活性。结果表明，l：320稀释的抗PRRSV抗体能显著增强PRRSVBJ．4株的繁殖(p

4、RGreen．I荧光定量PCR，Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系，建立了TNF．a及NF．rB、IKKB的SYBRGreen-I荧光定量PCR检测方法。BJ．4株分别经ADE途径和正常途径感染猪肺泡巨噬细胞，24h后收集细胞和培养上清。利用SYBRGreen．I荧光定量PCR检测TNF．a、NF—r,B和IKKD的mRNA表达变化。同时，采用定量ELISA检测猪肺泡巨噬细胞培养上清中TNF一仅的蛋白浓度。试验结果表明，PRRSV经ADE途径感染的猪肺泡巨噬细胞TNF．a表达下调，NF．r,B和IKK

5、p也同时表达卜．调。对PAM培养上清中TNF．a的蛋白检测结果表明，TNF．a的蛋白表达变化与mRNA的表达变化基本一致。关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；抗体依赖增强作用；TNF．a；表达变化；荧光定量PCREffectonTNF．0【ExpressionofPorcinePulmonaryAlveolarMacrophageswithPRRSVADEInfectionMaster：LiliFengSupervisor：GaipingZhangABSTRACTPorcinereproductiveandrespi

6、ratorysyndromevirus(PRRSV)WascharacterizedbyreproductivefailureinSOWSandgiltsandrespiratorydiseasesinpiglets．PRRSVisendemicintheworld’Slargestporkproducingnationsandaccountsformassiveglobaleconomiclosseseachyear．Antibody-dependentenhancementofinfection(ADE)is

7、oneofthemostimportantimmunologicalfactors．andisalsooneofthemajorproblemsinpreventingandcontrollingPRRS．PRRSVisknownforitsrestrictedcelltropism，primarilyinfectingporcinealveolarmacrophages(PAM)viareceptor-mediatedendocytosis．TNF-0【，producedmostlybymacrophages，

8、isakindofmonokines．Itsmainfunctionsareinflammatorypromotionandimmunologicalregulation．Nuclearfactor-r,BfNF-KB)，asthecenterofcellsignaltransduction，isacriticalregulatorofinnateandadaptivei