抗blys抗体对km3荷瘤裸鼠移植瘤的作用

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3、⋯⋯⋯⋯44中文摘要抗BIys抗体对KM3荷瘤裸鼠移植瘤的作用摘要目的：多发性骨髓瘤(Multiplemyeloma．MM)是一种浆细胞恶性克隆增生性疾病，属于B细胞分化终末阶段的恶性肿瘤。目前，多发性骨髓瘤在我国的发病率约为1／10万到2／10万，已经超过急性白血病，位居血液系统恶性肿瘤发病率的第2位。近年来治疗多发性骨髓瘤的方法分为干细胞移植、万珂(硼替佐米)联合方案、传统联合用药治疗方案等。但多发性骨髓瘤仍是不可治愈的血液恶性疾病，随着复发次数的增多，治疗越来越困难，表现为更难获得缓解，缓解持续的时间也越来越短。因此寻找更多治疗靶点，具有非常重要的意义。B细胞恶性肿瘤

4、是由于淋巴细胞增殖失控所致，可以发生在B细胞发育的任何时期。B淋巴细胞刺激因子(Blymphoeytestimulator，BlyS)是1999年发现的肿瘤坏死因子(TNF)超家族新成员之一，其通过与细胞表面的3个受体：B细胞成熟抗原(BCMA)、穿膜蛋白活化物(TACI)和细胞活化因子受体(BAFF．R)而与B淋巴细胞特异结合并诱导其增殖、分化及分泌IgG、IgA和IgM等免疫球蛋白，在体液免疫反应中发挥着重要作用。Blys是关键的B细胞生长因子，在肿瘤发病过程中起重要作用。我们的前期研究]一作显示：BLyS在多发性骨髓瘤患者的外周血中高表达，并随着其病情的好转而逐渐下降

5、，提示BLyS与多发性骨髓瘤发病有关。因此，抑制Blys作用的药物可以作为抗恶性B细胞肿瘤的治疗目标。本研究中，以分泌Blys的MM细胞系KM3为靶细胞，体外和体内实验两方面研究抗BlyS抗体对KM3荷瘤裸鼠移植瘤的生物学效应，为多发性骨髓瘤患者的临床靶向治疗提供理论基础和实验数据。方法：1体外试验1．1细胞培养和传代人MM细胞系KM3细胞，培养于含10％胎牛血清、100U／ml青霉素和100U／ml链霉素的RPMll640培养液，在37℃、5％C02、95％湿度的培养箱中培养，2--一3d传代1次，实验采用对数生长期细胞。中文摘要1．2MTT比色实验检测不同浓度抗BlyS

6、抗体对KM3细胞活力的影响体外培养人MM细胞株KM3细胞，采用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium．basedcolorimetricassay，MTT)比色法检测抗BlyS抗体不同浓度组(251xg／ml、30卜tg／ml、35J_tg／m1)、不同时间(24h、48h、72h)对KM3细胞增殖的影响。(上述各组剂量参照Anti．humanBLySAntibody冻干粉说明书确定)。1．3流式细胞术检测不同浓度抗BlyS抗体对KM3细胞细胞凋亡的影响实验组以不同浓度(251xg／ml、301ag／ml、35I_tg／m1)抗BlyS抗体处理48h后，应用流式细胞术检测抗B

7、lyS抗体对KM3细胞细胞凋亡的影响。2．体内实验2．1KM3荷瘤裸鼠模型的建立将处于对数生长期的KM3细胞，用无m清的RPMll640培养基洗涤2次后，重悬于1：1混匀无血清的RPMIl640培养基和Matrigel中，调整细胞密度为1×108／ml，每只裸鼠右前肢外侧皮下接种0．2ml(细胞数2x107／只)，共12只。2．2观察裸鼠成瘤率各组以接种肿瘤细胞后15天为限，裸鼠右前肢外侧可见可测量肿块为标准，成瘤率=成瘤只数／总只数×100％。2．3实验动物分组实验动物随机分为以下3组(每组3只)：各组以接种肿瘤