转基因食品dna提取及寡核苷酸芯片检测技术的研究论文

《转基因食品dna提取及寡核苷酸芯片检测技术的研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、硕士学位论文}Y2257692IIIIIIIIIIIIIIIIIII⋯转基因食品DNA提取及寡核苷酸芯片检测技术的研究硕士研究生：蔡翠霞指导教师：马文丽教授摘要转基因生物(GeneticallyModifiedOrganism，GMO)是利用现代分子生物技术，将某些生物的基因转移到其他物种中，改造生物的遗传物质，使其在形状、营养品质、消费品质等方面向人们所需要的目标转变。以转基因生物为直接食品或为原料加工生产的食品就是“转基因食品(GeneticallyModifiedFoods，GMF)’’【11。随着基因工程技术的日趋成熟及在农产品上的广泛应用，转基因食品应运而生，并以惊

2、人的速度进入人们的生活。2011年全球转基因作物种植面积达1．6亿公顷，比1996年的170万公顷增长94倍12]，而以转基因作物为原材料加工的食品已达上万种。转基因食品给人类带来了丰富的食品供应和巨大的经济效益，但到目前为止，转基因食品对人类健康的安全性一直受人们质疑【3，41。某些转基因食品引起中毒、过敏反应、降低人体抵御病毒的能力、改变机体肠道菌群平衡等危害已有报道【5一。为了维护消费者的知情权和选择权，世界上的很多国家和地区先后出台了相应的法律和管理方法，对转基因食品实行强制标识或自愿标识。2002年我国农业部颁布的《农业转基因生物标识管理办法》，规定对5大类17种产

3、品必须进行标识【7J。对转基因食品进行标识基于能检测到转基因成分。因此建立准确、快速、高效的转基因成分检测技术至关重要，而高质量DNA模板的获取，是转基因食摘要品进行基因检测的前提和关键。核酸提取包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程，纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分，如蛋白质、多糖、盐等杂质彻底分离去除的过程。裂解方法包括化学裂解法(表面活性剂SDS、CTAB、高盐等)、酶裂解法(蛋白酶K、溶菌酶、裂解酶等)和机械裂解法(研磨等)f8】。最常用的纯化方法，一是有机溶剂抽提再沉淀，二是介质纯化。介质纯化是利用某些固相介质，在特定的条件下选

4、择性吸附的特点，实现核酸与蛋白质及其他杂质的分离。由于加工食品成分复杂，DNA破坏降解严重，因此从加工食品中提取DNA，潜在困难很大。目前国内外很多学者在积极探索、深入研究各种高效的转基因食品DNA提取方法。本研究针对转基因食品的不同加工程度，构建和优化了各种加工程度的食品DNA的提取方法。首先，对于转基因农产品，采用Chelex一100法快速提取转基因农产品DNA，Chelex．100是一种由苯乙烯和苯二乙烯共聚体组成的化学离子螯合树脂，其悬液在碱性环境(pHl0一l1)和100。C的条件下，可导致细胞破裂，DNA从细胞核中释放，同时Chelex．100能结合许多可能影响下

5、一步分析的非核酸物质【91。由于Chelex．100能有效除去非核酸有机物，并且通过结合金属离子，防止DNA降解，具有经济、简便、高效等优点，目前已被广泛用于从微量血液、组织斑块、精斑、骨骼等法医物证检材【10．151。本研究比较国标(GB／T19495．3．2004)CTAB．1法和Chelex．100法提取转基因大豆GTS40．3．2DNA浓度和纯度，对检测结果进行统计学分析，结果显示Chelex．100法提取的DNA浓度较国标CTAB．1法高(t浓度=10．424，P浓度--0．000)，而纯度较CTAB．1法低(t蚴r=12．684，P纯度=O．ooo)，但是作为模板

6、用于PCR扩增，效果与CTAB．1提取方法并无明显差别；对比两种方法提取的DNA在．20。C下保存一个月内的PCR检测效果，结果未见明显差别；将Chelex．100法应用于其他农产品的DNA提取，效果理想。其次，对于轻中度加工食品，采用改良传统的CTAB法。CTAB法是提取植物DNA的经典方法，也是文献报道最多的提取转基因食品DNA的方法¨6。91，TI硕士学位论文但是传统的CTAB法由于操作繁琐，耗时长，试剂组成复杂，酚、氯仿等有机溶剂易造成环境污染等问题，在使用上受到一定的限制。本研究改良传统CTAB法，利用硅膜吸附柱纯化DNA，减少应用氯仿等有毒的有机溶剂，大大缩短了操

7、作时间，比较该方法与国标(GB／T19495．3．2004)CTAB．1法提取转基因大豆GTS40．3．2DNA的浓度和纯度，对检测结果进行统计学分析，结果显示改良CTAB法提取的DNA浓度和纯度均较国标CTAB．1法高(t浓度=9．471，P浓度=o．001；t纯度=3．253，P纯度：0．0S1)，差异具有显著性意义，表明该方法提取的DNA效果较理想，同时将其应用于轻中度加工食品的DNA提取中，取得理想效果。第三，针对油脂经过深加工，DNA含量低，且受破坏严重，提取难度大的特点，本研究利用硅膜吸附柱