内源性血管抑制因子抑制眼底新生血管机理的研究

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1、f10liltIrlllIfrrflIIrfrill1rulY2250623卜-海交通大学医学院博士学位论文内源性血管生长因子抑制眼底新生血管的机理研究STUDYoFENDOGENOUSPROTEINTOSUPPRESSoCULARNEOVASCULARIZATION作者姓名:张岐学号:0097249268导师姓名:孙晓东专业:眼科学研究方向:眼底新生血管申请学位级别:博士培养单位:上海交通大学医学院附属上海市第一人民医院资助基金项目:国家自然科学基金30973259国家973计戈lJ201CB707

2、500关键词:答辩日期:国家自然科学基金30973259国家973计划201lCB707500内源性血管抑制因子,眼底新生血管,血管内皮成长因子,年龄相关性老年黄斑变性Oneclickstaing,新生血管染色,巨噬细胞2012年10月卜海交通大学医学院博士学位论义上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进

3、行检索,可以采用影印、索引或扫描等复制手法保存和汇编本学位论文。保密口,在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口√。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名:豸艮磁指导教师签名:日期:2012年10月1日卜海交通大学医学院博士学位论义上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包括任何其他个人或集体已经发表或撰写的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本

4、人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:苏磋.日期:2012年10月1日.上海交通大学医学院博士学位论文内源性血管抑制因子抑制眼底新生血管的机理研究摘要新生血管性疾病(Neovascularization,NV)是当今很多眼科疾病导致视力灾难性丧失甚至致盲的主要原因。在正常视网膜血管的发育过程中,血管内皮细胞(Vascularendothelialcell,VEC)在各种细胞因.了作用下增殖并通过细胞外基质(Extracellularmatrix,ECM)进行迁移有序的形成血管。而在

5、病理性NV形成过程中,在眼的相关部位如虹膜、视网膜、及脉络膜可形成无序的,异常形态结构及无功能的血管形成。这些新生的血管很容易发生渗漏、出血、进而引起视网膜水肿、纤维增生、视网膜玻璃体出血或牵引性视网膜脱离可以导致潜在的灾难性的视力丧失。本研究中,我们尝试探讨运用内源性血管抑制因子来治疗和抑制眼底NV并简要的讨论眼底NV的发生机制。我们着重研究了内源性血管生长抑制因子对于眼底NV的作用机制。内源性血管抑制因子,是一组机体自身存在的抑制血管生成的负反馈分子,对机体正常生理作用的于预和影响小。在研究中我们

6、发明了一利-新的免疫染色方法可以高质量定性和定量的评价视网膜新生血管(Retinalneovascularization,RNV)以及脉络膜新生血管(Choroidalneovascularization,CNV)。本研究提供了几种眼底NV可行的新型治疗靶点,不仅可以作为有价值的研究工具,并且可能具备潜在的治疗前景。卜海交通大学医学院博士学位论文第一部分:1OneClickStaining一种特殊的新生血管特异性免疫组织化学染色以用于研究新生血管和巨噬细胞关系研究目的:本研究的目的是研究和探索新的染色

7、方法以提高及规范化视网膜血管和新生血管(NV)的染色,对新生血管更准确的进行定性定量分析。方法:对缺氧诱导新生血管的小鼠,在出生后17天,对其视网膜表面产生的新生血管进行免疫组织化学染色,分别运用了荧光标记的GSAlectin抗体和没有荧光标记的抗体和不同长度的染色时间。与此同时,在缺氧诱导新生血管模型小鼠出生后的第13,15,17,19,2l,23,25天进行伞视网膜新生血管和巨噬细胞的体外染色,铺片拍照以观察新生血管和巨噬细胞的关系。同时对出生后21天rhoNEGF转基因小鼠采用同样体外染色方法,

8、可以特异性地染色视网膜下血管。结果:对缺氧诱导的小鼠新生血管模型(ROP模型)视网膜新生血管在用GSA标记的Lectin抗体染色40分钏t后,可以观察到清晰的新生血管的细微结构包括新生血管前端的丝状足突,并且视网膜原有的结构血管没有或者仅有少量背景颜色,非常利于使用图像分析软件来定性和定量的评价新生血管。当以GSA标记的Lectin抗体和抗F4/80的抗体或者抗iNOS的抗体进行视网膜双重染色,结果发现iNOS在生长和退行过程中新生血管高表达,而在视网膜

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