den2 ngc株对鼠源性dc tlr7信号通路相关蛋白表达与细胞因子分泌的影响

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1、贵阳医学院2012届硕士研究生论文《中国图书资料分类法》分类号：R392.12单位代码：10660学号：S090027贵阳医学院二零一二届硕士学位论文DEN2NGC株对鼠源性DCTLR7信号通路相关蛋白表达与细胞因子分泌的影响研究生：曾雯导师：左丽教授年级：2009级专业：免疫学国家973前期研究重点项目（资助号：2008CB517408）国家自然科学基金项目（资助号：31060129）二零一二年四月二十七日1贵阳医学院2012届硕士研究生论文目录摘要„„„„„„„„„„„„„„1前言„„„„„„„„„„„„„„3材料与方法„„„„„„„„„„„„5结果„„„„„„„„„

2、„„„„„20讨论„„„„„„„„„„„„„„29参考文献„„„„„„„„„„„„„33英文摘要„„„„„„„„„„„„„39致谢„„„„„„„„„„„„„„41略缩词表„„„„„„„„„„„„„42论文原创性声明„„„„„„„„„„44附：综述„„„„„„„„„„„„452贵阳医学院2012届硕士研究生论文DEN2NGC株对鼠源性DCTLR7信号通路相关蛋白表达与细胞因子分泌的影响专业：免疫学研究生：曾雯导师：左丽教授摘要目的：通过动态检测DEN2NGC株感染小鼠髓源性DC后TLR7信号通路相关蛋白及细胞培养上清中IFN-α、IP-10、TNF-α的水平，探讨TLR7在

3、登革病毒感染过程中的作用。方法：利用白纹伊蚊C6/36细胞增殖DEN2NGC株，通过RT-PCR扩增、测序鉴定病毒，TCID50滴定毒力；直接免疫荧光检测DEN2(MOI=0.4)吸附鼠源性DC，利用RT-PCR检测相应时间点被感染DC内DEN2核酸水平；Western-blot动态检测TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达；双抗体夹心ELISA法检测细胞培养上清IP-10、TNF-α、IFN-α的水平。结果：1.白纹伊蚊C6/36细胞增殖DEN2NGC株病毒，其E基因区部分序列与5.8GenBank提供的相应序列同源性达99.1%，对C6/36细胞的TCID50为10

4、。2.rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导C57/BL6小鼠髓源性DC，5d后获得纯度为70%的未成熟DC。3.DEN2可感染鼠源性DC，被感染DC内病毒核酸水平48h达最高，72h有所降低。4.DEN2感染鼠源性DC后24hDEN2感染组TLR7、MyD88、NF-κB的表达均高于正常对照组；48hDEN2感染组TLR7表达低于正常对照组，但MyD88、NF-κB的表达高于正常对照组；72hDEN2感染组TLR7、MyD88、NF-κB的表达均较前降低，且TLR7、MyD88的表达低于正常对照组。5.DEN2感染鼠源性DC后，DEN2感染组细胞培养上清IFN-α、IP

5、-10的水平明显高于正常对照组，IFN-α逐渐升高，72h分泌量达最高，可分泌933.94±29.02ρg/ml，IP-10在48h分泌达高峰，分泌量为834.44±43.60ρg/ml，结果具有统计学意义(P<0.05);TNF-α仅在感染后24h高于正常对照组，且具有统计学意义(P<0.05)。3贵阳医学院2012届硕士研究生论文结论：1.rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导，可获得纯度为70%的小鼠髓源性未成熟DC。2.DEN2NGC株可感染小鼠髓源性未成熟DC,且其核酸水平在DC内有所变化。3.DEN2感染DC后TLR7蛋白的表达24h较正常对照组增高，随着病毒

6、复制表达降低，MyD88、NF-κB蛋白的表达与病毒核酸水平呈正相关。4.DEN2可刺激小鼠髓源性未成熟DC分泌IFN-α,IP-10,TNF-α等细胞因子。关键词：DEN2NGC株；树突状细胞；TLR7；细胞因子4贵阳医学院2012届硕士研究生论文1.前言登革病毒(Denguevirus,DEN)为被覆包膜的单股正链RNA病毒，属黄病毒[1]科黄病毒属，根据其免疫原性不同分为四种血清型。DEN感染性疾病包括登革热（Denguefever,DF）,登革出血热(Denguehaemorrhagicfever,DHF),登革休克综合征(Dengueshocksyndrome,

7、DSS),DEN感染已成为全球性重要的公共[2]卫生问题，其中以登革2型病毒(Denguevirustype2,DEN2)感染最为常见和[3]严重。树突状细胞（Dendriticcell，DC）是目前认为功能最强大的抗原提呈细胞(Antigen-presentingcell,APC）,可激活或抑制免疫细胞进而发挥免疫调节作[4]用。分布于各种组织的未成熟DC可监视入侵的病原微生物，摄取抗原后迁移至引流淋巴结T细胞区，分化为成熟DC，生物学特征随之发生改变，低表达与[5,6]吞噬有关的受体，捕获及处理抗原的能力明显降低，产生IL