免疫复合物在prrsv-ade作用中的研究

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1、河南农业大学硕士学位论文免疫复合物在PRRSV--ADE作用中的研究姓名：张宜娜申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：夏平安；崔保安201205中文摘要猪繁殖与呼吸综合征病毒(PorcineReproductiveandRespiratorySyndromevirus，PRRSV)是能够引起猪繁殖与呼吸综合征(PorcineReproductiveandRespiratorySyndrome。PRRS)的一种具有传染性的病毒，该病毒主要造成仔猪呼吸障碍和母猪流产。PRRSV易变异，是单股正链RNA病毒，可引起猪

2、的持续性感染和免疫抑制，具有抗体依赖性增强作用(Antibody-dependentenhancement，ADE)，因此研究PRRSV的ADE作用感染机制对PRRS的防治具有重要意义。FcYR可分为激活型和抑制型两种，而FclrRIIB是目前发现的唯一的抑制型的受体，在天然免疫和适应性免疫反应中发挥调节作用。本研究通过研究免疫复合物经Fc3'R途径增强PRRSV增殖作用，为进一步深入研究免疫复合物对PRRSV-ADE的调节作用机制提供理论依据。本研究以不同浓度非感染性免疫复合物分别处理猪肺泡巨噬细胞(PAM细胞)，

3、经PRRSV感染48h后用已建立的PRRSVSYBRGreenI实时定量PCR方法检测感染细胞中病毒RNA。结果显示，当非感染性免疫复合物作4倍和8倍稀释时，PRRSV的复制水平较病毒感染组略为升高，说明免疫复合物能经FcTR以非剂量依赖性方式增强PRRSV复制。本试验用5倍稀释鼠抗猪FcTRIIB抗体特异封闭PAM细胞表面Fc3,RIIB受体，经不同浓度的非感染性免疫复合物与病毒的混合物感染PAM细胞48h后用同样的方法检测感染细胞中病毒RNA。结果显示，2倍(2．635mg／mL)稀释的免疫复合物在FeaRIIB

4、被封闭的情况下同样能明显的促进病毒增殖，表明免疫复合物可通过激活型FeaR增强病毒复制。在上述试验基础上，又选择4倍稀释的免疫复合物(1．30mg／mL)分别于感染前、感染后、或与病毒同时来处理PAM细胞，感染12h、24h、36h和48h后用实时定量PCR方法检测感染细胞中病毒RNA。结果显示，非感染性免疫复合物在感染12，24和36h时间段内均能明显促进病毒的增殖，但在48h后不显著。说明免疫复合物在感染36小时内促进病增殖效果最强。本研究以4倍稀释的免疫复合物处理PAM细胞，处理12h、24h、36h和48h后

5、用相对荧光定量PCR方法分别检测PAM细胞中IFN．a、IL．10和TNF．0【的mRNA水平，结果显示，在处理24，36和48h时间段内，免疫复合物均能降低IFN．0L和IL—10的mRNA水平，但和正常细胞相比没有明显差异，而TNF-a的mRNA水平较正常细胞略为升高。本试验以4倍稀释的免疫复合物分别于感染前、感染后、或与病毒同时来处理PAM细胞，用相对荧光定量PCR方法分别检测PAM细胞中IFN一Ⅱ、IL．10和TNF吨的mRNA水平。结果显示，在感染48h后，免疫复合物能明显升高PRRSV诱导的IFN．a和T

6、NF．Q的mRNA水平，但在36h前没有明显规律，而在各时问段内，均能降低IL一10的mRNA水平。说明免疫复合物经FcTR调节PRRSV诱导的细胞因子转录没有明显规律，这可能是因为免疫复合物同时能与激活型和抑制型FcTR结合造成的。本研究用5倍稀释鼠抗猪脚RIIB抗体封闭PAM细胞，经PRRSV感染12h、24h、36h和48h后用实时定量PCR方法检测感染细胞中病毒RNA，同时用相对荧光定量PCR方法分别检测各组PAM细胞中IFN-a、IL一10和TNF-a的mRNA水平。实验结果显示，在感染12和24h时间段内

7、，封闭组中病毒复制水平略低于病毒感染组，但差异不显著。而在感染36h时间段内，病毒的复制水平明显升高，但在48h时间段内，病毒的增殖与病毒感染组相比变化不明显。说明Fc丫RIIB的选择性激活对PRRSV增殖的影响表现为先抑制后促进。同时在病毒感染各时间段内，封闭组中IFN-n和TNF．ⅡmRNA水平均高于病毒感染组，而IL一10的mRNA水平则明显下降，且显著低于病毒感染组。说明FeTRIIB的选择性激活在PRRSV感染的免疫反应中能增强抗病毒因子的水平。以上结果也说明PRRSV在细胞内增殖可能并不完全与细胞内抗病毒

8、因子的水平直接相关，这暗示PRRSV在PAM细胞内复制存在更复杂的作用机制。关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；荧光定量PCR；非感染性免疫复合物；抗体依赖性增强作用；Fc／R：2THEEFFECTSoFIMMUNECoMPLEXoNADEoFPRRSVINFECTIoNSupervisor：Pro￡XiaPing’anMasterCandidat