脑源性神经营养因子在大鼠骨癌痛中的作用及其神经免疫机制

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1、苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个入或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证粥而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：日期：喳!皇：令苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术

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3、因子(brain-derivedneurotrophicfactor，BDNF)是神经元—胶质细胞间”对话”的重要信号分子，这一神经痛后异常分泌的BDNF是由小胶质细胞上P2X4激活实现的。作为与神经痛相似又有其独特性的疼痛，骨癌痛状态下尚未发现存在类似BDNF介导的改变。据此，我们推测，脊髓小胶质细胞P2X4受体激活介导的BDNF释放可能参与骨癌痛痛敏的发生。本研究将结合在体、离体实验，采用siRNA、行为学，real-timePCR，WesternBlot，ELISA，免疫组化等方法，通过分子水平(P2x4受体和BDNF)、细胞水平(小胶质细胞和神经元)以及整体水平(免疫和感觉系统)的”

4、对话”来初探疼痛的神经免疫机制。【关键词】脑源性神经生长因子(BDNF)；P2X4受体；骨癌痛；神经免疫机制；大鼠第一部分脑源性神经营养因子参与大鼠骨癌痛的发生目的和方法探讨脑源性神经营养因子(Brain-derivedneurotrophicfactor，BDNF)在大鼠骨癌痛发生中的作用及其神经免疫机制。应用Walker256乳腺癌细胞种植于大鼠一侧胫骨髓腔，建立骨癌痛模型，并通过疼痛行为学、影像学、病理组织学等评估肿瘤及疼痛发生发展情况；以下按照下述研究目的进行相应的实验分组，并分别采用疼痛行为学(n--10)，Westernblots(n=4)，Real-timePCR(n=4)，免

5、疫组织化学(n=4)，小RNA干扰(smallinterferingRNA，siRNA，n=4)技术以及磺基罗丹明B(sulforhodamineB，SRB)方法(n=6)进行研究：①观察骨癌痛大鼠脊髓及背根神经节(DRG)BDNF表达产物的变化；②观察小胶质细胞抑制剂米络环素对骨癌痛大鼠中文摘要BDNF在大鼠骨癌痛中的作用及其神经免疫机制脊髓BDNF表达的调节作用及其镇痛效应；⑨研究BDNF中和抗体对大鼠骨癌痛的镇痛效应及其下游磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1／2(phosphorylationofextracellularsignal-regulatedproteinkinasel／2，p

6、-ERKl／2)机制；④针对小胶质细胞上BDNF表达的siRNA筛选及转染复合物的毒性检测：⑤观察BDNFsiRNA对骨癌痛大鼠的镇痛效应及其可能机制。结果①骨癌痛大鼠L4～6脊髓后角和DRG的BDNFmRNA及蛋白表达均增加，且峰值在造模后第6天(n=4，P<0．01)；②早期(造模后第4～6天连续注射)鞘内注射米诺环素可明显减缓大鼠骨癌痛(机械撤爪阈值PWT及行走评分ambulatoryscores)(n=10，P

7、天，骨癌痛大鼠L4--一6脊髓后角0X-42表达上调；且Ox4加DNF双标产物也上调。③鞘内注射BDNF中和抗体减缓骨癌痛大鼠机械痛敏(机械撤爪阂值PWT)(n=lO，P