红杉醇对糖尿病大鼠血管内皮的保护作用及机制研究

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1、分类号硕士学位论文密级红杉醇对糖尿病大鼠血管内皮的保护作用及机制研究Protectiveeffectofsequoyitolonvascularendotheliumindiabeticratsandtheunderlyingmechanisms作者姓名：戴丽学科专业：药理学学院(系、所)：中南大学指导教师：李元建教授答辩委员会主席中南大学二O一二年五月原创性声明本文声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其它人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其它单位的学

2、位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者：芈喻皿年j月且日关于学位论文使用授权说明本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论为被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。期：盟年—￡月兰五日硕士学位论文中文摘要红杉醇对糖尿病大鼠血管内皮的保护作用及机制研究摘要研究背景糖尿病是以

3、长期血糖水平升高为基本病理改变的代谢紊乱疾病，且伴有多脏器损害。糖尿病血管并发症是糖尿病患者致残、致死的主要原因。研究表明，氧化应激是糖尿病血管并发症的主要机制之一。Src同源区结构域蛋白C(SHC)家族拥有三个成员：ShcA、ShcB和ShcC。ShcA基因编码2种mRNA，翻译3种蛋白，分子量分别为46，52和66m(p46shcA、p52shcA和p66shcA)，前两者由同一种mRNA上的不同启动子翻译。P66shcA是与哺乳动物生命周期相关的蛋白，也是近年来研究细胞氧化应激涉及的主要蛋白之一。研究表明，敲除p66shcA基因可以使小鼠的寿命延长30％，其机

4、制为p66shcA的缺失加强了机体对氧化应激的抵抗。红杉醇(Sequoyit01)在红豆杉科植物中含量丰富，其结构为5-0一甲基一肌醇，具有抗氧化作用。此外，发现红衫醇可明显竞争性抑制o【一葡萄糖苷酶活性，同时促进脂肪细胞摄取葡萄糖，而发挥降低血糖作用。本实验将探讨红杉醇对糖尿病大鼠血管内皮的保护作用，其机制是否与p66shcA／活性氧(ROS)信号通路相关。研究方法硕士学位论文中文摘要动物实验：高糖高脂饮食加单次腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)35mg／kg，建立2型糖尿病大鼠模型。实验分为正常对照组、2型糖尿病组、阿卡波糖组(20mg／

5、kg)、红杉醇低剂量组(25mg／kg)、红杉醇高剂量组(50mg／kg)。大鼠连续灌胃给药4周后进行口服葡萄糖耐量(Oralglucosetolerancetest，OGTT)实验，取血检测大鼠空腹血糖(Fastingbloodglucose，FBG)；分离血浆用比色法检测血浆中丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量及放射免疫法检测血清胰岛素(Fastinginsulin，Fins)含量，计算胰岛素抵抗指数(Insulinresistance，IR)、胰岛素敏感指数(Insulinactivityindex，IAI)和胰岛素分泌指数(Insulins

6、ecretionindex，IS)；RealtimePCR检测大鼠胸主动脉中p66shcAmRNA表达；免疫组织化学方法检测大鼠胸主动脉p66shcA蛋白表达及其磷酸化水平；DHE(Dihydroethidium)染色检测胸主动脉活性氧(Reactiveoxygenspecies，ROS)水平；取胸主动脉观测血管内皮依赖性舒张反应。细胞实验：实验分设正常对照组、高糖组(30mM)、甘露醇组(30mM)、高糖+红杉醇(O．3、1、30M)组。各药物处理组预孵育人脐静脉内皮细胞株(Humanumbilicalveinendothelialcells，ⅢⅣECs)1h，再

7、用高糖(30mM)处理HUVECs24h。比色法检测细胞培养液上清中乳酸脱氢酶(Lacticdehydrogenase，LDH)释放、Caspase一3活性及细胞中MDA含量；RealtimePCR检测细胞中p66shcAmRNA表达；WesternBlot检测细胞中p66shcA蛋白表达及其磷酸化水平；DHE染色检测细胞中ROS水平。硕士学位论文中文摘要结果1．与正常对照组比较，糖尿病大鼠FBG、口服糖耐量曲线下面积(Areaundercurve，AUC)、IR显著升高，Fins、IAI、IS显著减低；红杉醇可显著降低空腹血糖，升高血清中胰岛素水平及改善IS，