黄芩苷对大鼠肝cyp3a酶的影响

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1、郑州大学硕士学位论文黄芩苷对大鼠肝CYP3A酶的影响姓名：杨辉申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：乔海灵201205摘要黄芩苷对大鼠肝CYP3A酶的影响研究生杨辉，。．．导师乔海灵教授郑州大学基础医学院临床药理学教研室河南郑州450052中药是我国传统医药学宝贵的财富，对中国乃至世界医药学的发展做出了重大的贡献，但由于中药作用机理的复杂性，多数中药的体内代谢过程目前尚不明确，使得其在临床应用方面缺少科学依据。目前临床上中药与化药，中药与中药之间的联合应用同渐普遍，有关其所导致的不良反应事件的报道明显增多，目前对于中药及其有效成分的研究已经成

2、为热点。黄芩苷(Baicalin，BG)另J名黄芩甙，是从唇形科多年生双子叶草本植物黄芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根中提取的一种黄酮类单体化合物，是黄芩药理作用发挥的主要物质基础之一。黄芩苷生物活性显著，具有抗菌、利胆、解热、降压、抗氧化、抗HIV病毒以及抗肿瘤等作用。二十世纪七十年代以来，我国开始将黄芩苷制成各种类型的制剂，在临床上广泛应用并取得了很好的疗效。随着黄芩苷及其制剂广泛使用，临床上与其他多种药物联合应用的机会越来越多，故黄芩苷与其它药物发生相互作用风险的比率也越来越高，安全性问题日渐突出。药

3、物对CYP450酶的诱导或抑制作用是引起药物相互作用发生的主要原因之一，而药物间的相互作用是导致不良反应发生的重要因素，其中代谢性药物相互作用的发生率所占的比例最高。细胞色素P450酶是药物在体内氧化代谢的重要酶系，参与进入机体约90％的药物代谢，其中CYP3A酶在肝脏中占近1／3的比例，是CYP450酶系中重要的亚型。有关中药复方制剂对CYP450酶的影响研究报道较多，中药有效成分对CYP450酶影响的研究较少，因此，进一步加强中药有效成分黄芩苷对CYP450酶的影响研究具有很大的实用价值。摘要研究目的本研究采用体外和体内实验研究黄酮类单体化

4、合物黄芩苷对大鼠肝CYP3A酶的活性的影响，从而阐明和评价黄芩苷对大鼠肝CYP3A酶的作用，指导临床合理有效用药。研究方法，1．黄芩苷对大鼠肝CYP3A酶的体外抑制作用1．1制备大鼠肝微粒体断头处死大鼠，即刻取出肝脏，用4℃预冷的Tris．HCL缓冲液反复冲洗，应用钙沉淀法进行大鼠肝微粒体的制备，保存于液氮。1．2测定大鼠肝微粒体蛋白的含量采用Bradfrod法进行大鼠肝微粒体蛋白含量的测定。1．3孵育反应CYP3A酶的孵育体系总体积2509L，反应体系包含肝微粒体蛋白，NADPH，MgCl2，EDTA，磷酸盐缓冲液和探针药物咪达唑仑，在37。

5、C水浴中进行反应。分对照组和实验组，对照组加等体积磷酸盐缓冲液，实验组加黄芩苷。预孵育5min后加NADPH启动反应。1．4色谱条件DiamonsilC18(200x4．6mm，5rtm)色谱柱；流动相为甲醇：乙腈：水=53：13：34；流速lml·min～；柱温25℃；检测波长220rim；进样量：201aL。1．5咪达唑仑方法学考察按照生物样品的测定要求，对大鼠肝微粒体中咪达唑仑测定方法的专属性、精密度、回收率、稳定性进行考察。1．6黄芩苷方法学考察建立大鼠肝微粒体中黄芩苷的HPLC测定方法，并考察方法的专属性、精密度、稳定性等。HPLC色

6、谱条件：51amDiamonsilC18(200x4．6ram)色谱柱；流动相为甲醇：水：磷酸=53：47：0．2；流速lml·min一；柱温25℃；检测波长278nm；进样量为251aL。1．7酶活性测定HPLC法测定探针药物咪达哗仑的生物转化程度。2．黄芩苷连续给药对大鼠肝CYP3A的影响2．1制备黄芩苷溶液2．2给药方案将22只雄性SD大鼠，随机分为对照组和实验组，实验组每天给予尾静脉注射黄芩苷(900mg·kg"1)，对照组每天给予尾静脉注射相同剂量的生理盐水注射液，均连续给药12d，于末次给药后4h断头处死，取肝脏。2．3制备大鼠肝微

7、粒体断头处死大鼠，立即取出肝脏，用预冷的"Iris缓冲液反复冲洗，采用钙沉淀法制备肝微粒体，液氮保存。2．4测定微粒体蛋白的含量选用Bradfrod法进行微粒体蛋白含量的测定。Il摘要2．5孵育反应孵育体系总体积为250pL。反应体系包含肝微粒体蛋白，NADPH，MgCl2，EDTA，磷酸盐缓冲液和探针药物(咪达唑仑)，在37℃水浴中进行反应，分对照组和实验组。预孵育5min后加NADPH启动反应，反应时间为20min。2．6色谱条件同“1：4色谱条件"项下的操作方法。2．7酶活性测定HPLC法测定探针药物咪达唑仑的生物转化程度。2．8酶动力学

8、参数的测定HPLC法测定探针药浓度并计算酶动力学参数。3．统计分析方法采用SPSSl0．0软件进行数据的统计分析，用t检验将实验组和对照组相比较，P<