趋化因子受体ccr4在胆囊癌中的表达及其功能研究

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1、苏州大学博士学位论文趋化因子受体CCR4在胆囊癌中的表达及其功能研究姓名：孙登群申请学位级别：博士专业：外科学指导教师：吴浩荣2012-11趋化因子受体CCR4在胆囊癌中的表达及其功能研究中文摘要中又手两斐研究背景大多数胆囊癌患者确诊时已属于晚期，做为胆道系统最常见的恶性肿瘤，胆囊癌预后很差，原因是胆囊癌极易浸润及转移，因此研究胆囊癌转移的相关机制，对胆囊癌转移的预防和治疗具有重要意义。越来越多的证据表明，趋化因子及其受体与肿瘤的生长和转移相关。有研究表明，血液系统恶性肿瘤及原发性胃癌的转移中，趋化因子受体CCR4均扮演一定重要的角色。但是，CCR4在胆囊癌侵袭、转移过程中所起的作用的机

2、制，到目前为止，尚未见报道。本课题利用shRNA干扰技术沉默CCR4基因，研究CCR4对胆囊癌细胞周期、增殖、侵袭和迁移运动能力的影响，探讨趋化因子受体CCR4在胆囊癌组织中表达及CCR4与胆囊癌临床预后的关系，以寻求胆囊癌治疗的新途径。第一部分CCR4的表达与胆囊癌生物学特征之间的关系目的：研究人胆囊癌细胞在利用siRNA干扰沉默趋化因子CCR4基因后，增殖、周期、侵袭和迁移运动能力的变化。方法：不同人胆囊癌细胞CCR4的表达水平用Westernblot检测，胆囊癌细胞GBC-SD用慢病毒感染，CCR4基因用siRNA-CCR4沉默，干扰效果用Western-blot鉴定。胆囊癌细胞G

3、BC-SD分为三组：GBC-SD、GBC-SD／CCR4-RNAi及GBC-SD／control细胞，这三组细胞用CCR4的配体CCLl7(趋化因子)作用。三组细胞的增殖能力用CCK-8法检测；细胞周期用流式细胞仪检测；细胞迁移和侵袭能力用Transwell小室运动侵袭试验检测；Westernblot方法检测CCR4基因沉默对其相应配体CCLl7和CCL22蛋白表达的影响。结果：沉默CCR4基因，对胆囊癌细胞GBC-SD的细胞周期及增殖均无影响，但是能明显抑制GBC-SD细胞的侵袭及运动迁移的能力，CCR4基因的沉默，并不能中文摘要趋化因子受体CCR4在胆囊癌中的表达及其功能研究影响肿瘤

4、细胞CCLl7和CCL22基因的表达。结论：胆囊癌细胞GBC-SD表达趋化因子受体CCR4，CCR4与胆囊癌细胞的生长和增殖无关，却可以促进胆囊癌细胞GBC-SD的侵袭和转移。第二部分CCR4在胆囊癌组织中的表达及其I临床意义目的：研究在胆囊癌组织中CCR4的表达，以及CCR4与临床病理因素问的相互关系、及其对胆囊癌预后的影响。方法：CCR4在胆囊癌组织标本及慢性胆囊炎胆囊粘膜组织标本中的表达情况用免疫组织化学法检测，分析时结合临床资料进行，应用Kaplan-Meier法进行CCR4表达阳性组与阴性组生存分析，组间分析应用log-rank检验，采用Cox回归多因素模型进行多因素分析，CC

5、R4在胆囊癌组织中的表达与临床病理因素的相关性采用贮检验。结果：胆囊癌细胞胞浆和／或胞膜有CCR4表达，呈棕黄色，在胆囊癌中，CCR4蛋白的表达明显高于慢性胆囊炎胆囊上皮组织(P

6、结转移及组织学分级有关，是胆囊癌患者术后生存的独立的危险因素，趋化因子CCR4与胆囊癌的侵袭与转移有关。关键词：CCR4；慢病毒载体；RNA干扰；趋化作用；趋化因子；胆囊癌II作者：孙登群指导老师：吴浩荣趋化因子受体CCR4在胆囊癌中的表达及其功能研究英文摘要rnl●1n·●n·-ll‘l11eexpresslonandIUnctionoItheClaemokinereCeDtorCR4inthegallbladdercancerABSTRACTBackgroundMostpatientsofgallbladdercancerarediagnosedatadvancedstage，the

7、gallbladderisthemostcommonmalignancyofthebiliarysystemwithpoorprognosis．becausethetumorisextremelypronetOinvasionandmetastasis．Sotheresearchofthemetastaticmechanismofthegallbladdercancerisofgreatsignificanceforthepreve