葡萄糖浓度波动对兔视网膜müller细胞的作用及可能机制

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1、硕士研究生学位论文分类号：R77学校代码：10392学科专业代码：100212学号：200901618福建医科大学硕士研究生毕业论文葡萄糖浓度波动对兔视网膜Müller细胞的作用及可能机制EffectsandmechanismoffluctuateglucoseonrabbitRetinalMüllerCells学位类型：医学硕士所在学院：南京军区福州总院476医院研究生：石瑜珍学科、专业：眼科学导师：过贵元教授研究起止日期：2011年04月至2012年02月答辩日期：2012年05月30日二零一二年二月万方数据硕士研究生学位论文1万方数据硕士研究生学位论文目

2、录中文摘要………………………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………………………3前言……………………………………………………………………………………5实验一兔视网膜Müller细胞的培养及鉴别…………………………..……………7材料与方法…………………………………………………….……………7结果…………………………………………………………………………11讨论…………………………………………………………………………12结论…………………………………………………………………………14实验二葡萄糖浓度波动

3、对兔视网膜Müller细胞的影响…………………………15材料与方法…………………………………………………………………15结果…………………………………………………………………………17讨论…………………………………………………………………………19结论…………………………………………………………………………22全文小结……………………………………………………………………………23参考文献……………………………………………………………………………24致谢…………………………………………………………………………………29附图……………………………………………………

4、……………………………30综述一………………………………………………………………………………40综述二………………………………………………………………………………472万方数据硕士研究生学位论文葡萄糖浓度波动对兔视网膜Müller细胞的作用及机制中文摘要目的：体外培养兔视网膜Müller细胞，模拟糖尿病患者体内血糖急性波动状态，观察葡萄糖的稳定性对兔视网膜Müller细胞生长活性及iNOS表达的影响，并探讨血糖波动在糖尿病视网膜病变中的作用及其可能机制，为糖尿病视网膜病变的治疗及预防提供理论依据。方法：使用酶消化法培养兔视网膜Müller细胞；通过电镜、荧光免

5、疫技术进行细胞鉴定和纯度评估。取生长状态良好的第二代细胞用于实验，实验分为5组：正常对照组（glucose5.5mmol/L）；高浓度葡萄糖持续组（glucose30mmol/L）；葡萄糖浓度波动组（glucose5.5/30mmol/L，日间高糖3h，低糖2h，波动3次，高糖过夜）；渗透压对照组1（（glucose5.5mmol/L+甘露醇24.5mmol/L）持续培养）；渗透压对照组（2日间（glucose5.5mmol/L+甘露醇24.5mmol/L）3h，低糖2h，波动3次，（glucose5.5mmol/L+甘露醇24.5mmol/L）过夜）。用MT

6、T法测定Müller细胞生长活性的变化。采用荧光免疫技术对Müller细胞胞内的诱导型一氧化氮合酶（induciblenitricoxidesynthase，iNOS）进行荧光标记，通过图像分析软件测定平均光密度值，观察Müller细胞内iNOS的表达变化。结果：（一）使用酶消化法培养兔视网膜Müller细胞，培养2-3d，培养瓶底即可见有部分贴壁细胞，细胞透明，呈圆形或略呈梭形，可见部分突起；约16d，细胞铺满整个瓶底，形态较均一，呈不规则形，可见细胞突起；电镜下可见Müller细胞胞浆内含有丰富的8~10nm微丝及各种细胞器；荧光免疫标记见兔视网膜Müll

7、er细胞胞内视黄醛结合蛋白（cellularretinaldehydebindingprotein,CRALBP）、谷氨酰胺合成酶（glutaminesynthetase,GS）呈绿色和红色荧光标记，二者阳性率均95%以上；（二）葡萄糖浓度波动组（5.5/30mmol/L）与高浓度葡萄糖持续组（30mmol/L）作用于兔视网膜Müller细胞3d后，与正常对照组及渗透压对照组1、2相比较，葡萄糖浓度波动组与高浓度葡萄糖1万方数据硕士研究生学位论文持续组细胞生长活性下降（p<0.01），iNOS表达升高（p<0.01）；且葡萄糖浓度波动组与高浓度葡萄糖持续组比较

8、，葡萄糖浓度波动组细胞生长活性显著下降