ssos演替用于pmi推断的法医学研究

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1、万方数据中图分类号＆墨窆UDC610硕士学位论文学校代码!Q533密级公珏SSOs演替用于PMI推断的法医学研究SSOssuccessionasapotentialindicatorforPMIestimation作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：谢丹法医学法医昆虫学基础医学院蔡继峰教授论文答辩日期zQ盟乌通盔臼答辩委员会主瘟中南大学二零一四年五月万方数据原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或

2、其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：』迫出日期：—碰年』月盟日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：牡导师签名趟期：础一年j月幺日／7∥^口卜忾作者签名：j杠导师签名』龟曲期：础一年j月

3、幺日万方数据SSOs演替用于PMI推断的法医学研究摘要背景：死亡时间(postmorteminterval，PMI)推断一直是法医工作的研究重点和热点，腐败尸体的PMI推断更是法医学实践中的难题。微生物在尸体腐败过程中的作用越来越引起法医学者的重视。尸体腐解的原因是昆虫和微生物共同作用的结果。尤其在机体死亡至昆虫接触尸体之前的时间间隔里，尸体的腐败分解更是由微生物主导完成的。微生物中能产生腐败代谢产物的细菌通常称为特定腐败微生物(specificspoilageorganisms，SSOs)。已有研究表明腐败过程也是SSOs相互作用和演替的过程，为研究尸体上SSOs的演替规律进

4、行PMI推断的法医学研究提供了理论和实践基础。目的：在隔离昆虫和未隔离昆虫两种不同的环境下，调查大鼠尸体上SSOs的演替规律，对比大鼠尸体上口腔、眼周、阴道不同部位SSOs种类差异，分析不同PMI的SSOs种类及数量变化规律，寻找具有PMI推断价值的优势SSOs，探索利用SSOs演替规律进行PMI推断的程序和方法。并对人尸体SSOs演替规律进行PMI推断的初步探索。方法：运用Miseq高通量测序技术，研究PMI=Oh，24h，216h时的大鼠尸体口腔SSOs，初步筛选可规律性演替的菌群。基于该筛选结果，通过细菌常规生化鉴定法及16SrDNA分子鉴定法双向验证，对比研究大鼠尸体不

5、同部位相关时间点SSOs种类变化规律；应用细菌分析仪进行菌种半定量计数，进一步验证不同PMI有规律演替的菌群。并收集调查明确PMI的成人尸体上菌种的分布情况，探索利用SSOs演替规律对人尸体PMI推断的新途径。结果：Miseq高通量测序结果在生物分类学种水平上共获得81个种的SSOs，其中链球菌和巴斯德菌在口腔SSOs结构中占主要地位，分别在每个组中占25％以上的序列数。尸体腐化24h后，大部分SSOsII万方数据呈现递减和消失趋势，而八叠球菌属及葡萄球菌属呈递增的趋势并成为优势菌，SSOs多样性显著降低。通过常规生化鉴定法对SSOs菌种初步定性与定量并通过16SrDNA分子鉴

6、定双向验证，获取了隔离昆虫和未隔离昆虫两种不同的环境下，大鼠尸体口腔、眼周和阴道三个不同部位，PMI=0h，24h，216h各个确定时间点上SSOs的详细演替资料，共发现7个科(真菌，放线菌，假单胞菌，杆菌，肠杆菌，放线菌，葡萄球菌)，并细分为38个种。成人尸体上共发现了8个科30个种的SSOs，种类和数量均要低于健康成人，成人和大鼠尸体之间的SSOs分布规律有着很多的相似性。结论：本研究发现通过Miseq高通量测序，对比分析PMI=Oh的样本M1，PMI=24h的样本M2以及PMI=216h的样本M3发现，大鼠尸体在24h内口腔SSOs多样性显著降低，少数优势菌群如肺炎链球菌

7、(Streptococcussp．)和侵肺巴斯德菌(Pasteurellapneumotropica)等凸显。而在尸体晚期PMIM3阶段出现的优势菌属为八叠球菌属(Sporosarcina)及葡萄球菌属(Staphylococcus)。在尸体各部位SSOs演替过程中猪链球菌(StreptococcussuisI)：解乳糖奈瑟菌(Neisserialactamica)及粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)演替规律凸显。大肠杆菌(Escherichiacoli)和奇异变形杆菌(p