喹赛多作用相关基因表达的信号通路研究

《喹赛多作用相关基因表达的信号通路研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、华中农业大学硕士学位论文喹赛多作用相关基因表达的信号通路研究姓名：郭菊申请学位级别：硕士专业：基础兽医学指导教师：戴梦红201206喹赛多作用相关基因表达的信号通路研究专业：兽医药理学研究生：郭菊导师：戴梦红副教授f国家兽药残留基准实验室(HZAU)／农业部食品安全评价重点开放实验室，华中农业大学中国武汉430070)摘要喹赛多作为喹嗯啉类药物的新品种，具有良好的抗菌促生长作用，并且具有毒副作用小、安全性高、用药后吸收快、消除迅速、残留期短、无积蓄作用等优点。实验室运用DDRT技术，从喹赛多作用下猪肝组织中筛选出7条差异表达的基因，分别是类胰岛素样生长因子．1(Insulin．1

2、ikeGrowthFactor．1，IGF．1)、表皮生长因子fEpidermalGrowthFactor，EGF)、ADP核糖聚合酶(PolyADP—ribosepolymeras，PARF)、抗细胞凋亡因子1(TheDefenderAgainstApoptoticDemh1，DADl)、补体C3(ComplememComponent3，c3)、转酮醇酶(transketolase，TK)和新基因。其中DADl在阻止细胞凋亡中起作用；而C3补体能通过免疫系统的激活来发挥抗菌抗炎作用，以增加机体免疫力；转酮醇酶在磷酸戊糖途径发挥着关键作用，调节葡萄糖代谢，并以此影响着细胞的增殖等

3、生命活动；EGF、IGF．1属于生长因子类，对于生长具有重要的作用，PARP与DNA的损伤修复有关。因此喹赛多的抗菌促生长作用可能与这7个基因的表达密切相关。由于信号通路是调节基因表达的一种重要方式，喹赛多是通过哪些信号通路来调控这7个基因，在调控这7个基因的信号通路中，主要的信号通路与喹赛多的药物作用有怎样的联系，是本论文所要解决的问题。1．PK．15细胞中喹赛多调控其作用相关基因表达的信号通路实验运用RT-qPCR技术，采用相对定量方法，用喹赛多(21xM)作用于PK．15细胞分别作用0．5h．8h后对7个基因mRNA表达水平的时效关系进行测定。结果表明在PK．15细胞系中，

4、喹赛多(2州)作用之后，DADl、TK、PARP、EGF、C3、新基因6个基因的mRNA表达水平在1h显著升高，IGF-1mRNA表达水平在喹赛多作用2h显著升高。运用RT-qPCR、WesternBlot等技术，对PK一15细胞中喹赛多调控7个基因表达相关信号通路进行研究。结果表明，P13K(phosphatidylinosit01．3．kinase)、NF-KB(Nuclearfactorofkappalightpolypeptidegeneenhancer)信号通路对IGF-1的表达起主要作用，Erkl／2(extracellularsignal—regulatedkina

5、sel／2)、JNK(c-JunN—terminalkinase)、Jak2(Januskinase)信号通路对IGF．1的表达可能起辅助作用；对于TK的表华中农业大学2012届硕士研究生学位论文达，NF-KB信号通路对其表达起主要作用，Erkl／2、JAK2、P13K、TGF．p(transforminggrowthfactor)对其表达可能起辅助作用：P13K、TGF．B、NF．KB信号通路对补体C3的表达起主要作用，Erkl／2起辅助作用；P13K、NF．KB信号通路对PAI冲表达起主要作用，TGF-p、Erkl／2对PAI冲表达起辅助作用；对于DADl的表达，研究表明，P

6、13K信号通路对其表达起主要作用，NF．id3、JAK2、TGF．B对其表达可能起辅助作用；P13K、NF．KB信号通路对EGF表达起主要作用，TGF．B信号通路对EGF表达起辅助作用；P13K、Erkl／2、NF．KB信号通路对新基因的表达起主要作用。总体来说，在PK．15细胞系中，喹赛多主要通过P13K和NF．KB信号通路来调控其作用相关7个基因的表达。2．猪原代肝细胞中喹赛多调控其作用相关基因表达的信号通路实验运用RT-qPCR技术等技术，对喹赛多孵育猪原代肝细胞7个基因mRNA表达水平的时效关系进行测定，发现在猪原代肝细胞中，喹赛多孵育细胞O．5h后，新基因、DADlmR

7、NA表达水平显著升高，EGFmRNA表达水平升高且差异极显著；在1h时，IGF-1、TK、PARPmRNA表达水平升高且差异极显著；2h时，C3mRNA表达水平升高且差异极显著。运用RT-qPCR技术，对猪原代肝细胞喹赛多调控7个基因表达相关信号通路进行研究。结果表明，在猪原代肝细胞中，P13K是调节EGF的主要信号通路。JNK、P13K是调节IGF．1的主要信号通路。喹赛多主要通过TGF．D信号通路来调节C3表达。喹赛多主要通过TGF．B、P13K信号通路来调节DADl表达。喹