大豆根际解磷菌分离及其定殖分析

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1、万方数据学校代码：10225学号：S14538学位论文大豆根际解磷菌分离及其定殖分析指导教师姓名：申请学位级别：论文提交日期：授予学位单位：郎敬杨洪一副教授东北林业大学硕士学科专业：微生物学2014年月论文答辩日期：2014年6月东北林业大学授予学位日期：2014年月答辩委员会主席：论文评阅人：许修宏葛菁萍宋金柱聋必栉素大擎万方数据UniversityCode：10225RegisterCode：S14538DissertationfortheDegreeofMasterIsolationofPhosphate·-solubilizin

2、gBacteriainSoybeanRhizosphereandtheAnalysisoftheColonizationforBacteriaCandidate：Supervisor：AssociateSupervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：Dateof0ralExamination：University：LangJingHongyiYangMasterofScienceMicrobiologyJune，2014NortheastForestry万方数据摘要土壤中磷元素缺乏使植物的生

3、长受到严重影响，人为向土壤中施加化学磷肥，可在一定程度上缓解缺磷现象，但植物对化学磷肥的吸收和利用不足25％，造成资源浪费，并且残留在土壤中的化学磷肥还会引起土壤板结，形成恶性循环。因此，当前生物磷肥的研究倍受科学家们的关注。本研究利用PVK平板筛选结合摇瓶复筛，对东北地区大豆根际土壤样本中的解磷菌进行了筛选及鉴定，并对解磷菌的应用效果以及其在植物根际土壤中的定殖情况进行分析。1、从东北各地区大豆田选取土壤样品，利用PVK平板初分离法结合NBRIP摇瓶复筛，成功筛选出高效解磷菌菌株。此外，还利用钼蓝比色法在摇瓶复筛阶段对这些菌株进行了解

4、磷能力的测定。2、利用CTAB法提取细菌总DNA，以提取的细菌DNA为模板，用细菌通用引物进行PCR，将PCR产物纯化后进行序列测定。测序结果显示：肇东1号菌株、阿城1号菌株与海伦1号菌株与巨大芽孢杆菌序列相似度最高；北安4号菌株与枯草芽孢杆菌序列相似度最高。此外，还利用普通光学显微镜及扫描电镜对菌株进行了形态学鉴定。3、在盆栽实验中，测定了施入解磷菌前后的大豆根际土中的可溶性磷含量，结果显示，施入解磷菌后的大豆根际土较施入解磷菌前的土壤中可溶性磷含量明显增多；用同样的方法测定施入解磷菌前后一些处理中大豆叶片中的磷含量也有一定的升高。4

5、、用处理过的细沙作为介质，将一定量的难溶性的磷化物(Cas(P04)2)均匀混合于细沙中，加入配制好的培养液，将解磷菌接种在由难溶性磷化物作为唯一磷源的细沙培养基上，在适宜的条件下培养一段时间后分别用直接浸提法和快速消煮法处理培养物，用钼蓝比色法测定其中可溶性磷的含量，结果显示加入解磷菌增加了可溶性磷含量。5、分别提取加入解磷菌前后的大豆根际土的土壤细菌。e2,DNA，用带“GC夹”的引物进行PCR扩增，将PCR纯化后的产物进行变性梯度凝胶电泳，分析解磷菌在土壤中的定殖情况，结果显示两株解磷菌菌株可能能够在大豆根际土壤中有效定殖。关键词

6、菌株筛选，解磷细菌，定殖，DGGE，解磷能力万方数据AbstractLackofphosphorusinsoilaffectedseverelythegrowthofplants．Itcanreducethephenomenonofphosphorusdeficiencytosomeextentbyaddingthechemicalphosphorusfertilizerartificiallyinthesoil，butitseffectiveutilizationislessthan25％．Therefore，thiscanresul

7、tinwasteofresource．Inaddition，theremnantchemicalphosphorusfertilizerinthesoilalsocancausesoilhardening，SOitiseasytoformaviciouscircle．Currently，theresearchaboutbiologicalphosphorusfertilizerattractedtheattentionofmanyscientists．OnthebasisofPVKplatescreeningcombinedwithsh

8、akeflaskscreeningmethod，thestudyscreenedandidentifiedthephosphate-solubilizingbacteriafromthesoybean’Sr