深圳地区献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染特征分析

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1、南方医科大学2011级硕士学位论文深圳地区献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染特征分析CharacterizationofocculthepatitisBvirusinfectioninShenzhenblooddonors课题来源：国家自然科学基金(81071348和81371801)学位申请导师姓专业名培养类培养层所在学人杜鹏名黎诚耀教授称免疫学型学术型次硕士研究生院生物技术学院答辩委员会主席江丽芳教授答辩委员会委员江振友教授付涌水教授张桂红教授张雁教授2014年3月14日广州硕士学位论文硕士融：杜鹏指撇：黼摘要目的：乙型肝炎病毒(he

2、patitisBvirus，HBV)是危害人类健康的最严重问题之一。HBV具有全球流行性，我国的流行率虽从1992年的9．75％下降到2006年的7．18％，但我国慢性HBV感染者仍有9300万人，慢性乙型肝炎患者约2000万人，每年因HBV导致的肝硬化和肝癌死亡的人数约有30多万人，新发乙型肝炎有50．100万例。有研究发现，经输血传播HBV的风险明显高于丙型肝炎病毒与艾滋病病毒，其风险主要来自血清转换前的窗口期、变异病毒株与隐匿性乙型肝炎病毒3个方面。近来发现乙型肝炎表面抗原(HBsAg)[习q性的患者体内也存在着HBVDNA，部

3、分HBsAg．／HBVDNA+的献血者可引起输血传播，严重影响了输血安全，这种HBsAg．／HBVDNA+的感染称为隐匿性乙型肝炎感染(OB0。2008年欧洲肝病研究协会(EASL)隐匿性HBV感染国际工作组对OBI进行了定义：将采用现行可利用的方法在肝脏中检出HBVDNA、血清(浆)中检出或检不出HBVDNA、HBsAg阴性的个体定义为OBI。在实际操作中，肝脏较难获得且检测难度较大，影响因素较多，因此，OBI定义为：机体存在乙肝病毒DNA，但无法检测到乙肝病毒表面抗原的HBV感染，可伴有或不伴有乙肝病毒核心抗体(抗．HBc)或者乙

4、肝病毒表面抗体(抗．HBs)。HBV可分为A．H8个基因型，其分布具有明显的地域性，也与人种有关。欧洲北部、西部以及美国主要为A型，B、C型主要分布于亚洲，而D型分布摘要最广，我国北方地区以C基因型为优势株，南方地区B型最常见。OBI的发生与发展机制现在仍然不清楚，可能机制包括：(一)HBsAg和抗．HBs结合形成了免疫复合物；(二)变异体的形成影响了HBsAg编码区S基因对“a，’抗原决定簇的编码；(三)与其它肝炎病毒合并感染可能影响了HBV的复制，减少了HBsAg的合成。HBsAg的检测作为我国HBV检测的唯一指标，核酸检沏,lJ

5、(nucleicacidtest，NAIT)还没有纳入法定项目，输血存在HBV窗口期感染和OBI感染的输血残余风险，国内对B、C型OBI的研究停留在起步阶段，没有详细的OBI流行病学调查，关于B、C型OBI的分子生物学特性的分析也只有零星的报道，没有进行进一步详尽的研究，本课题对我国B、C型OBl分子生物学的研究具有重要意义：1，调查我国深圳地区OBI的流行情况；2，探讨我国B、C型OBI的分子生物学特征；3，为OBI基因型B和C的监测与防控策略提供重要依据，改进血液安全筛查方法；4，为OBI的临床发生、发展和个性化治疗方案提供理论指

6、导。材料：2010年4月．2012年12月深圳市血液中心采集的310，167份无偿献血者标本，其中初次献血者114，761份，占37％，重复献血者195，406份，占63％，所有标本经过表面抗原(胶体金试纸)与ALT(罗氏干式生化分析仪)初筛，然后进行酶免法(EIA)法和多联病毒核酸筛查技术检测。方法：(1)无偿献血者样本经进口和国产两种试剂进行HBsAg的检测，经美国诺华公司的TIGRIS全自动血液核酸检测仪进行三联荧光病毒单人份检测，使用化学发光法(CMIA，雅培)进行HBsAg的确认。(2)用QPCR方法进行HBsAg．／DNA

7、+样本HBV病毒载量的测定。(3)对HBsAg．／DNA+样本进行基本核心启动子／前C区(BCP／PC)、HBV全基因、Pre．S／S区、S区、Pre．C／C区的巢式PCR的扩增，PCR产物送公司测序。(4)从GeneBank基因数据库挑选我国B型和C型HBV野毒株作为OBI变异株的参考序列；使用MEGA软件分析OBI的S区序列以确定基因型。(5)将OBI样本全基因序列分为Pre。S／S、Pol、X、Pre．C／C，每个区核苷酸翻译成蛋白序列后和相应基因型的野毒株进行序列比对分析。(6)与野毒株基因序列比对，分析OBI毒株全基因序列调

8、控元件变硕士学位论文异特点以及引起的HBV生物学特征改变，包括启动子区域(SPl、SP2、CP、xP)、转录调控序列区(CURS、DRl、DR2、和NeE)、增强子区(ENHl和ENH2)。(7)统计学处理：采用SPSS