重组口蹄疫病毒vp1vp4蛋白诱导免疫应答地研究

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1、万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑皇垦盔些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：童蔓薄签字日期：刎中年∥月3日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑兰垦壅些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权

2、泣皇垦壑些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：蔓署j；每导师签名：签字日期：2J／斗年∥月jIS签字日期：彩形年f月7日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：万方数据摘要口蹄疫(foot．and．mouthdisease，FMD)是由口蹄疫病毒(FMDvirus，FMDV)感染偶蹄兽所引起的一种急性、发热性、高度接触性传染病。目前本病尚无有效的预防控制措施。清除病毒感染需要活化的CD8+T细胞、Th

3、l应答与高水平的中和抗体，但对于外源性抗原，则需要CDSa+DCs以抗原交叉提呈的方式激活CD8+T细胞。体外实验发现，被A型清道夫受体(SR．A)抑制剂处理的树突状细胞(DCs)提呈重组FMDV结构蛋白VPl一VP4的能力非但没有被抑制，反而还显著增强，这表明SR．A识别VPl．VP4对DCs启动的细胞免疫应答具有负调节作用。据此，我们给小鼠腹腔注射番泻苷B或单宁酸以阻断SR．A与VPl．VP4的结合，静脉注射细胞色素C以清除小鼠体内的CD8a+DCs，然后分别给上述小鼠皮下注射VPl一VP4与IMS251cVG佐剂混合所制成的试验疫苗，并以单

4、独注射VPl．VP4蛋白或商用口蹄疫灭活疫苗为对照，通过检测各组小鼠血清IFN吖与IL．4的含量和抗体效价与各类型抗体的含量，以揭示SR．A和CD80t+DCs在机体产生抗FMDV免疫应答中的作用。结果发现，单独注射VPl．VP4蛋白组小鼠血清IFN吖与IL一4的含量均比注射商用灭活口蹄疫疫苗组低，其中IFN-)'含量降低比较显著(P如．05)，而IL一4的降低不显著(P>D．05)。与单独注射VPl．VP4蛋白对照组相比，SR．A抑制剂番泻苷B处理组小鼠血清1L．4含量的下降显著(尸如．∞)，而IFN吖含量下降不显著(P>D．05)。与单独注射

5、VPl一VP4蛋白组相比，体内CD8a+DCs清除组小鼠血清IFN吖和IL一4的含量均有所降低，但IL．4含量下降明显(P姐酊)，而IFN吖含量下降不明显(P>D．05)。通过对小鼠血清抗体含量的检测发现，与单独注射VPl一VP4蛋白组相比，SR．A抑制剂处理组小鼠和体内CD8ct+DCs清除组小鼠血清总的抗体效价均降低，除单宁酸组差异不显著外(P>D．05)，其余各组均差异显著伊D．05)。通过检

6、测血清抗体类型发现，与单独注射VPl．VP4蛋白组相比，SR—A抑制剂处理组小鼠血清中lgGl、IgG2b、K型与九型轻链的含量均降低，而IgG2a、IgG3、IgA与IgM的含量均升高，除IgA差异显著(PD．05)。与单独注射VPl．VP4蛋白组相比，体内CD8ct+DCs清除组小鼠血清IgGl、IgG2b、IgG3、IgM、K型与九型轻链的含量均降低，除1c轻链的含量降低显著伊<0．05夕，九轻链含量的降低极显著伊

7、nD5夕；IgG2a与IgA的含量均升高，但两组相比差异不显著伊>D．05夕。以上结果表明，重组FMDV蛋白VPl．VP4在体内可被CD8a+DCs以SR．A识别，并主要通过MHC．II类分子途径激活CD4+T细胞，产生以IL．4为特征的细胞免疫应答。由于注射SR．A抑制剂和清除CD8a+DCs所产生的效果非常相似，万方数据所以CD8et+DCs可能是表达SR—A的主要细胞，同时也是番泻苷B和单宁酸发挥药理学作用的主要靶细胞。由于口蹄疫病牛体内IL．4的表达量高于健康牛，而抑制SR—A或清除体内CD8a+DCs均可使IL．4水平显著降低，并使Ig

8、A水平显著升高，所以将番泻苷B或单宁酸作为口蹄疫蛋白质疫苗的佐剂成分是可行的。关键词：口蹄疫病毒；重组VPl．VP4蛋白；细胞免疫应答；