桦褐孔菌多糖的提取、纯化及其抗肿瘤活性研究

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1、桦褐孔菌多糖的提取、纯化及其抗肿瘤活性研究StudyontheExtraction，PurificationandAnti-tumorActivityofPoly’saccharideFromInonotusobliqUUS学位论文完成日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：青岛科技大学研究生学位论文桦褐孑L菌多糖的提取、纯化及其抗肿瘤活性研究摘要随着人们工作压力的增大，肿瘤患者越来越多，且具有了年轻化的趋势，癌症已成为危害人类健康的第二杀手，仅次子心脑血管疾病。目前治疗恶性肿瘤仍以化疗、放疗、手术治疗为主。临床使用的抗肿瘤药物都会有不同程度的毒副作用，

2、比如化疗药物在破坏肿瘤细胞的同时，又破坏正常组织的细胞，使人体的免疫系统紊乱。从中药，．尤其是植物资源中寻找疗效好、毒副作用小的抗肿瘤活性成分，己成为国内外抗肿瘤研究的热门开发领域。动物和临床试验表明：桦褐孔菌多糖没有明显毒副作用，并已被证明具有抗肿瘤的功效。本实验在研究提取、脱蛋白和脱色方法的基础上，进一步对其单糖组成成分及其体外抗肿瘤活性进行了研究。首先，对桦褐孔菌粗多糖成分进行了提取，并通过正交试验确定了最佳提取工艺，其参数为：料液比1：40(W／V)、提取时间2．5h、提取温度90。C，在优化条件下进行重复实验，得出的多糖平均得率为1．82％，重

3、复性良好，多糖的纯度达到21．1％。其次，进行了粗多糖的脱蛋白质和脱色实验。通过考察多糖保留率和蛋白脱除率，比较了Sevage法、三氯乙酸(TCA)法、三氯乙酸一正丁醇(TCA-NBA)法、盐酸法、酶法辅助等方法的脱蛋白效果，结果酶法辅助三氯乙酸一正丁醇法的脱蛋白效果优，蛋白脱除率达N82．3％，且多糖保留率较高，达到76．1％，经脱蛋白的多糖纯度提高N81．1％；采用活性炭粉末、过氧化氢、壳聚糖和聚酰胺层析柱对桦褐孔菌多糖进行脱色，从脱色率和多糖保留率两方面进行考察，选择了脱色效果优的聚酰胺层析柱为适宜的脱色方法，其脱色率达至tJ89．3％，多糖保留率

4、为91．7％，经脱色的多糖纯度提高N85．8％。再次，对桦褐孔菌多糖中的单糖组成进行了分析。本论文采用1一苯基一3一甲基一5-口比唑啉酮(PMP)柱前衍生化高效液相色谱新方法来分析桦褐孔菌多糖中的单糖组成。结果显示，桦褐孔菌多糖主要含有甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖6种单糖。各单糖之问摩尔比为：甘露糖：鼠李糖：葡萄糖：半乳糖：木糖：阿拉伯糖-2．13：1．36：7．01：2．98：1：1．78。在桦褐孔菌多糖的PMP衍生化色谱图中发现了未知峰，经HPLC-MS分析未知物的m／z为164。采用桦褐孔菌多糖的提取、纯化及其抗肿瘤活性研究在水解

5、样品中加入一定量岩藻糖对照品的方法进行进一步的验证，结果显示，加入一定量岩藻糖的样品组在未知成分的相应保留时间位置的峰信号明显增加，由此推断未知成分是岩藻糖。最后，采用MTT法研究了桦褐孔菌多糖对人宫颈癌细胞(Hela)、小鼠骨髓瘤细胞(SP2)、入张氏肝细胞(Chang)增殖的抑制作用。桦褐孔菌多糖浓度在10～1000gg／mL的范围内，对Hela、SP2、Chang细胞的增殖均有明显的抑制作用，生长抑制率分别从4．78％至1]46．54％、2．89％至tJ44．90％、3．56％到22．56％，并呈浓度依赖性关系，各浓度问的生长抑制率存在显著性差异①

6、

7、rtrend．Nowcancerhasbecomethesecondkillerthathazardtohumanhealthaftercardiovasculardisease．Currenttreatmentofmalignanttumorsisstillgivenprioritytowithchemotherapy,radiotherapy,surgical．Anticancerdrugsinclinicalallhavedifferentdegreesofsideeffects，suchaschemotherapydrugscankilltumo

8、rcells，anddestroythenormaltissuecells，un