转录因子cebpβ参与hcmv ul111a基因转录调控的研究

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1、万方数据论文题目：整显国王￡堡垒￡照叁皇珏￡巡卫坠兰曼曼鳇国万方数据目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6刖吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45，J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48

2、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49致{射⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯67万方数据温州医科大学硕士学位论文转录因子c彻Pp参与HCMVULIIIA酆]转录调控的研究中文摘要目的；本研究通过检测HCMV潜伏感染与激活感染THP．1细胞中转录因子C／EBPB的表达，分析C／EBPD与HCMVULlllA基因启动子区的结合率、ULlllA基因启动子结合区组蛋白修饰和DNA甲

3、基化情况，探讨转录因子C／EBPp参与HCMVULIIIA基因的转录调控作用，为进一步研究HCMV感染的分子机制提供实验依据。方法：1．建立HCMV潜伏与激活感染THP．1细胞模型HCMVADl69株(MOI----5)感染THP．1细胞，370C、5％C02环境中培养lOd。荧光定量PCR测定细胞内HCMV．DNA拷贝数；RT-PCR检测HCMVULl23、UL83和LUNAmRNA的表达，判断HCMV是否为潜伏感染状态。HCMV潜伏感染THP-1细胞后，加入佛波酯(PMA，终浓度为100ng／山)，370C、5％C02环境中

4、培养lOd。荧光定量PCR方法测定细胞内HCMV．DNA的拷贝数；RT-PCR检测HCMVULl23、UL83和LUNAmRNA的表达，判断经PMA刺激诱导后HCMV是否为激活感染状态。2．转录因子C／EBP13-与HCMVULlllA基因启动子区结合实验荧光定量PCR测定HCMV潜伏与激活感染时cmvlL—lO剪接体的转录表达；染色质免疫共沉淀(ChromatinImmunoprecipitation，CHIP)分析HCMV潜伏与激活感染时C／EBPB与ULI11A基因启动子区结合情况；Westernblot测定HCMV潜伏与

5、激活感染时细胞核内C／EBPB的表达。3．HCMVULlllA基因启动子区表观遗传学修饰实验采用ChIP技术分析HCMV潜伏与激活感染时ULIllA基因启动子C／EBPp结合区组蛋白与抗组蛋白H3．K9乙酰化抗体、二甲基化抗体的结合情况。采用亚硫酸氢盐测序法(BisulfiteSequencingPCR，BSP)分析HCMV潜伏与激活感染时ULlllA基因启动子区DNA甲基化状态。结果：1．HCMV潜伏与激活感染THP．1细胞模型的建立HCMVADl69株感染THP．1细胞后，细胞内HCMV．DNA拷贝数随着培养时万方数据温州医

6、科大学硕士学位论文间的增加基本不变。ULl23mRNA在感染后第l天即有表达，第5天达到高峰，随后逐渐下降直至消失：UL83mRNA在感染过程中未见表达：LUNAmRNA在感染过程中持续表达，提示HCMV在THP．1细胞中处于潜伏状态。PMA刺激诱导HCMV潜伏感染的THP．1细胞分化后，细胞内HCMV-DNA拷贝数随着培养时间的增加而升高：UL83mRNA在PMA刺激后第5天开始持续表达。ULl23mRNA、LUNAmRNA在感染过程中均持续表达，提示经PMA刺激诱导后HCMV在分化的THP．1细胞中处于激活状态。2．转录因子

7、C／EBP13-与HCMVULlllA基因启动子区结合分析HCMV潜伏与激活感染TI-IP．1细胞4d后，荧光定量PCR检测发现，cmvIL一10剪接体在HCMV潜伏感染中未转录表达，而HCMV激活感染中可见转录表达；ChIP分析显示，HCMV潜伏感染时转录因子C／EBPB与ULlllA基因启动子区的结合率较HCMV激活感染低(P<0．05)；Westernblot检测显示，HCMV激活感染细胞核内转录因子C／EBPp表达高于潜伏感染。3．HCMVULl11A基因启动子区表观遗传学修饰结果ChIP实验结果表明，在HCMV潜伏与激

8、活感染过程中，HCMVULl11A基因启动子C／EBPB结合区均未见组蛋白H3．K9乙酰化和甲基化修饰。BSP分析发现，在HCMV潜伏与激活感染组中均未见C／EBPp结合位点存在DNA甲基化，而HCMV潜伏感染时ULlllA基因启动子区DNA总甲基化率高于激活感