针灸对ad模型大鼠海马工aβ降解相关酶的影响研究

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1、湖北中医药大学学位论文原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖北中医药大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：孑缪罗伽，P年57月≯日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解湖北中医药大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文

2、被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部份内容，可以采用复印、缩印或其他手段保留学位论文；学校可以根据国家或湖北省有关部门的规定送交学位论文。同意《中国优秀博硕士论文全文数据库出版章程》的内容。同意授权中国科学技术信息研究所将本人学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。(保密论文在解密后遵守此规定)敝储签名黪锄张扣粒子研年r月刃日针灸对AD模型大鼠海马区AB降解相关酶的影响研究本课题来源于国家自然科学基金项目：益肾调督法对hi)模型大鼠神经元轴突生长的影响及针灸作用机制研究(81273864)和线粒体损伤在AD级联反应

3、的作用及针灸保护机制研究(81173323)。目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．Ihbstragt⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．．II英文缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．VII前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1刚百⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一1实验研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯41实验设备和试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．42实验动物和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．53PreP和NEP的免疫荧光法检测⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．74实验结果⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131AD与阿尔茨海默病⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯132关于AD的清除途径和相关降解酶⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．143“益肾调督”法治疗阿尔茨海默病⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯21结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．24参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯311综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯312研究生期间发表的论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯．42致谢⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．43中文摘要目的：

5、D淀粉样蛋白(hD)是构成阿尔茨海默病特征性病理改变之一老年斑的核心物质，因此减少hp的过量生成或促进其加速降解，减少Ap的聚集、沉降，是改善阿尔茨海默病病理进程的重要途径之一。根据目前已发表的研究文献，有关AD生成途径方面的研究已有了一定深度的探索，而有关hD降解方面的研究还需要更进一步深入。hp在细胞内主要是依靠自噬溶酶体与泛素蛋白酶体途径清除，在细胞外以及线粒体内则是经生物活性分子，即蛋白降解酶降解。目前已发现的hD的降解酶包括脑啡肽酶、前序列蛋白酶、内皮素转化酶、胰岛素降解酶、血管紧张素转换酶、纤溶酶和基质金属蛋白酶

6、一9等。本课题从AD降解的方面进行研究，选取脑啡肽酶和前序列蛋白酶作为研究指标，通过观察针灸百会穴和双侧肾俞穴对这两种降解酶在大鼠海马CAl区表达的影响，探讨“益肾调督”的针灸疗法治疗阿尔茨海默病的可能作用机制。方法：选用4个月月龄的雄性WiStar大鼠作为研究对象。所有大鼠经MorriS水迷宫筛选后，将符合条件的60只大鼠随机分为四组，即模型组、假手术组、治疗组和正常组。模型组采用双侧海马一次性注射凝聚态Ap，哪制备AD大鼠模型，假手术组采用相同的手术方法在颅内注射与Ap。圳等量生理盐水制备。治疗组选取百会穴和双侧肾俞穴进

7、行针刺(长25mm直径0．35mm毫针)治疗，用细艾条(直径约5mm)在穴位上方2～3cm处行温和灸，持续15min。该疗法1次／天，6天为1个疗程，疗程间休息1天，共治疗2个疗程。其他三组同步喂养，不予其他处理。治疗结束后，各组选取10只进行指标检测。本次研究采用免疫荧光法检测各组大鼠海马CAl区NEP和PreP的表达情况。结果：经过两个疗程的治疗后，用免疫荧光法检测发现：(1)在大鼠海马CAl区，模型组NEP的表达较正常组明显降低，其差异具有统计学意义(P<0．01)，而治疗组NEP的表达较模型组有显著提高(P<0．01

8、)；(2)模型组大鼠海马CAl区PreP的含量比正常组减少(P<0．01)，治疗组大鼠海马CAl区Prep的含量与模型组比较有显著提高(P<0．01)。结论：针灸“益肾调督”法可以通过上调大鼠海马CAl区NEP和PreP的表达，增加其含量，促进细胞内外侈淀粉样蛋白的降解，从而减少其聚集沉降