背根神经节中fcγrⅰ受体参与神经病理性疼痛的机制研究

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1、背根神经节中FcYRI受体参与神经病理性疼痛的机制研究郭雯雯1梁映霞1(通讯作者)于剑锋1田立2王立凤1(1潍坊医学院山东潍坊261053;2潍坊市中医院山东潍坊261041)【摘要】目的观察坐骨神经慢性压迫性损伤(chronicconstrictioninjuryofthesciaticnerve,CCI)对大鼠背根神经节(dorsalrootganglion,DRG)中Fc段γ受体I型(Fc-gammareceptortypeI,FcγRI)表达的影响,初步探讨其参与神经病理性疼痛的机制。方法35

2、只雌性Wistar大鼠随机分为7组(n=5):空白对照组(Control)、假手术组(Sham3d,7d,14d组)、手术组(CCI3d,7dJ4d组)。分别于术前、术后ld,3d,7d,10d,14d测定各组大鼠热/机械痛阈,并用Westernblotting方法检测术后各规定时间点DRG中FcγRI表达变化。结果Control组和Sham组间热/机械痛阈和FcγRI蛋白表达无统计学差异(P>0.05),CCI组大鼠热/机械痛阈明显下降(P<0.01)伴DRG中FcγR1表达量增多(P<

3、0.05)o结论DRG中FcγRI蛋白表达上调可能参与神经元兴奋性的提高,在神经病理性疼痛的形成与维持中发挥重要作用。【关键词】坐骨神经慢性压迫性损伤Fc段γg体I型背根神经节神经病理性疼痛大鼠【中图分类号】R745.4+2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2013)04-0077-03Fc段γ受体(Fc-gammareceptor,FcγRs)是免疫球蛋白G(immunoglobulinG,IgG)Fc段的细胞受体。二者结合后可产牛吞噬作用、抗体依赖性细胞毒作用

4、、释放细胞因子、细胞脱颗粒、活化补体等作用[1,2]0FcγRs至少可分为三类,FcγRI(CD64)是IgG的唯一高亲和力受体,而FcγRlI(CD32)和FcγRlII(CD16)则为低亲和力受体。众所周知,FcγRs在免疫系统中广泛存在。近年来研究发现传统意义上的免疫赦免区■神经系统中也有IgG和FcγRs的普遍分布及表达[3]。临床发现,低剂量静脉注射免疫球蛋白(intravenousimmunoglobulin,IVIG0.5g/kg/d)对慢

5、性疼痛、复杂区域疼痛综合征、干燥综合征相关性神经病疼痛及糖尿病神经病理性疼痛有缓解作用,II无明显不良反应[4,5,6,7]o据此推测神经系统内分布的FcγRs可能在lg镇痛过程中发挥桥梁作用。Andoh和Kuraishi[l]研究发现,体外培养的小鼠背根神经节(dorsalrootganglion,DRG)神经元细胞有IgG高亲和力受体FcγRI表达,而没有低亲和力受体FcγRlI>FcγRlII表达。本实验采用蛋白定量技术检测神经病理性疼痛模型大鼠DRG中Fcγ

6、RI表达的变化。1材料与方法1.1实验动物成年健康雌性Wistar大鼠35只(180〜220g),购自山东鲁抗医药股份有限公司。于安静、温暖、湿度适宜的环境中分笼饲养,每日光照12h,自由进食、饮水,适应环境一周后进行实验。1.2主要仪器和试剂1.2.1仪器ElectronicVonFrey刺激仪(IITCInc.美国),SW-200光热尾痛测试仪(成都泰盟科技有限公司),PR0200型精密组织匀浆器(上海季诺科贸有限公司经销),Eppendorf台式高速冷冻离心机(德国),680型全自动酶标仪(美国Bio-Rad公司),J

7、Y600C型电泳仪(北京君意东方电泳设备有限公司),TransferenceDecoloringShakerTS-8(海门市其林贝尔仪器制造有限公司),XJX-II型X射线摄影暗匣(上海跃进医用化学仪器厂)。1.2.2试剂SDS-PAGE蛋白上样缓冲液、彩色预染蛋白质分子量标准、超敏ECL化学发光试剂盒(碧云天),山羊抗CD64抗体(SantaCruz,CA),辣根酶标记兔抗山羊IgG、小鼠抗β-actin抗体、辣根酶标记山羊抗小鼠IgG(北京中杉金桥),其他试剂至少为分析纯。1.3动物分组及模型建立1.3.1分组

8、实验大鼠随机分为7组:空白对照组(Control组n二5)、假手术组(Sham组)、手术组(CCI组),Sham组与CCI组分设术后3d,7d,14d三个时间点,各时间点含实验动物5只。1.3.2模型建立腹腔注射100g/L水合氯醛(0.35・0.4ml/100g)麻醉大鼠,俯卧位固定,无

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