针刺对全脑缺氧缺血大鼠海马区自噬相关蛋白的影响研究

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2、医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名掣论文导师日期劬I叩年J月和日摘要ⅢIIIrllIIIIIrllllrlllIfilllJIIJY2622886目的：本论文有二个目的：一是探索针刺“靳三针头穴”对全脑缺氧缺血SD大鼠海马区自噬相关蛋白的影响，其针刺作用是否通过自噬途径改善模型幼鼠的神经元细胞的损伤情况，为针灸治疗缺氧缺血性脑病寻找新的实验思路；二是探讨在相同治疗时间长度下，针刺介入时间的不同是否对针

3、刺效果产生显著性影响，继而为临床更早的介入治疗提供有利证据。方法：文献研究：回顾当代医学对新生儿缺氧缺血性脑损伤的理解和诊疗进展、古代中医对新生儿缺氧缺血性脑病认识和现代中医在该领域的展望、自噬在缺氧缺血性脑病中的研究进展等三大内容。实验研究：包括两个实验项目。实验一为造模部分，运用延迟5分钟剖宫产的方法模拟新生儿宫内窘迫情景，制备全脑缺氧缺血新生SD大鼠模型，通过新生SD大鼠出生后的体重、第二天翻身实验、第14天的斜坡实验、悬吊试验和旷场试验、第21天脑组织病理切片评定造模是否成功，并根据行为学水平筛选模型大鼠，进入下一步实

4、验。实验二为针刺部分，将实验一中符合一定要求的模型大鼠分为针刺组和非针刺组，针刺组又根据针刺介入时间的不同分为卜9组，针刺每组都连续针刺7天，穴位选取“靳三针"相应头部穴位，配合一定手法和刺激时间，分别在幼鼠出生第14、21、28、35、42、49天对各组大鼠进行斜坡实验、悬吊实验和旷场实验，在第49天处死所有大鼠，运用流式细胞术检测各组大鼠大脑海马区自噬相关蛋白Beclin一1和LC3的实验检查结果。成果：实验一1、体重记录新生幼鼠出生后第2天和第14天的体重，发现正常分娩的新生幼鼠与模型幼鼠在出生后第2天体重的差异较大(P

5、=0．00)，到了第14天体重的差异己不甚明显(P=O．148)。2、第2天翻身第2天翻身均值比较中正常组与模型组有差异(P=0．034)，中位数比较有差异(P=0．008)，最大值、最小值比较无统计学差异(P=0．265，P=O．791)。3、第14天行为学斜坡实验正常组和模型组有显著统计学差异(P=O．000)，悬吊实验和旷场实验中央格时间未发现明显差异(P=0．066，P=O．209)。旷场试验中水平得分(P=0．002)、垂直得分(P=0．045)和理毛次数(P=0．009)中正常组和模型组有显著统计学差异。4、第21

6、天HE染色正常组：幼鼠海马区神经元细胞结构完整，细胞整齐排列，核仁清晰可见，细胞核圆而饱满，胞浆部分未见红染。模型组：幼鼠海马区神经元细胞见明显异常改变，细胞体积较正常组明显缩小，核仁不规则，细胞大量变形，散乱分布，其中部分变形神经元细胞核固缩深染，胞浆呈红染。实验二l、斜坡实验斜坡实验中各观察时间点未发现明显的差异，(P>0．05)。2、悬吊试验悬吊实验中第21天结果针刺组和非针刺组相比有显著差异，(P<0．05)。差值比较中第2l天与基线差值两组比较有显著差异，(P

7、明显的差异，(P>0．05)。4、自噬相关蛋白Beclin-1和LC3针刺组和非针刺组比较，其缺血灶中自噬相关蛋白BeClin一1(46．07，46．19)无显著差异，LC3(15．0l，10．85)针刺组百分比较高，无统计学差异。Beclin-1在针N2组、针N3组、针N6组、针N7组、针刺8组与非针刺组比较差异显著，结论：1、成功建立全脑缺氧缺血大鼠模型此造模方法为研究全脑缺氧缺血的产生机制和不同干预手段对HIBD大鼠模型的影响，提供了一个操作简单、实验动物生存率高的造模方法。2、建立全脑缺氧缺血大鼠模型的评价方法该实验确

8、立了以观察脑组织海马区病理学形态和动物行为学的模型评价方法，包括第二天翻身实验、第14天行为学(斜坡实验、悬吊试验、旷场试验)、第21天脑组织HE染色。3、建立全脑缺氧缺血大鼠模型的筛选方法设立斜坡实验和旷场试验单侧数据以均数±1．645倍标准差为临界值，筛选出下一步实验的模