差异表达的anxa10对人原发性肝癌细胞株(hepg2)基因表达谱影响的研究

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：影塥稿签字日期：加『乡年6月8日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解直昌盍堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权直昌太堂可以

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3、2基因表达谱的影响，初步阐明ANXAl0在原发性肝癌发生和发展中的基因调控作用，为原发性肝癌发生发展中的关键基因及其信号转导途径研究打下基础，为肝癌基因治疗寻找新的途径和理想的靶点。方法：1、体外实验，构建携带GFP过表达慢病毒ANXAl0，并将过表达慢病毒ANXAIO以MOI=IO转染人肝癌细胞株HepG2，分成实验组(LV-ANXAl0组)和空白对照组。过表达慢病毒ANXAl0的转染效率的确定是采用在荧光显微镜观察GFP表达，采用Illumina．Solexa测序比较两组细胞基因表达谱的差异，并采用qPCR验证相关的部分差异基因。2、体内实验，用胰酶消

4、化处于对数期生长的HepG2细胞，制成单细胞悬液，取200ulHepG2细胞悬液(1×107个／m1)接种于裸鼠右侧腋下。于接种后l周左右开始成瘤，第24天时瘤体直径约1-2cm大小，采用拖颈方式处死裸鼠并取出瘤体，剪成lmm3大小，分别接种至16只雌性裸鼠(6-8周龄)右侧腋窝皮下，1周后瘤体直径约0．3．0．5cm大小，将裸鼠随机分为2组，命名为实验组(转染过表达慢病毒ANXAl0)、空白对照组(PBS组)。实验组每只裸鼠给予过表达慢病毒ANXAl0量为2×107TU(100u1)，空白对照组每只裸鼠给予lOOul浓度为0．01mol／L的PBS；3h

5、后再次注射一次。4周以后采用拖颈方式处死16只裸鼠，并取出裸鼠皮下瘤体。采用免疫组化检测部分差异基因的表达水平。结果：1、重组慢病毒ANXAl0对人肝癌细胞株HepG2的数字基因表达谱有影响，通过对生物信息的分析，实验组与空白对照组比较，共有118个基因表达上调，12个基因表达下调。2、荧光定量PCR技术检测结果显示，实验组与空白对照组比较，实验组中VEGF、NDRGl、ATG4bmRNA表达明显下调，而HIF．10tmRNA表达上调，差异有统计学意义(P<0．05)，与DGE的分析结果一致。T『摘要3、免疫组化检测裸鼠皮下移植瘤结果显示：实验组较空白对照

6、组的VEGF、NDRGI、ATG4b蛋自质表达明显下调；而HIF—la蛋白质表达明显上调，差异有统计学意义(P

7、TRACTubjective：一1、TheoverexpressionlentiviralofhumanANXA10genewasconstructedandWastransfectedintohumanhepatocellularcarcinomacelllineHepG2．2、TodeterminetheeffectofoverexpressionlentiviralofhumanANXA10onthegeneexpressionprofileofhumanhepatocellularcelllineHepG2．Thegeneregulationrol

8、eofANXAl0inhepatocellularcarcinom