耐碳青霉烯类药物鲍曼不动杆菌耐药机制研究

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1、中图分类号：R89；R36；R39硕士学位论文耐碳青霉烯类药物鲍曼不动杆菌耐药机制研究院（系）、所临床医学院研究生姓名李光荣学科、专业内科学导师姓名刘靳波教授二Ο一三年四月目录耐碳青霉烯类药物鲍曼不动杆菌耐药机制研究......错误!未定义书签。前言.....................................................7第一部分碳青霉烯类药物耐药鲍曼不动杆菌耐药基因的研究........10材料与方法........................................

2、..........101材料...................................................102方法...................................................11结果....................................................131药敏实验结果...........................................132基因检测结果.....................

3、......................15讨论.....................................................19第二部分碳青霉烯类药物耐药鲍曼不动杆菌蛋白组学研究..........22材料与方法..................................................221材料...................................................222实验方法........................

4、........................223质量控制...............................................25结果....................................................251鲍曼不动杆菌蛋白质指纹图谱.............................252聚类分析结果...........................................27讨论.........................

5、...........................29结论....................................................31参考文献：..................................................32致谢....................................................35蛋白组学技术在临床微生物检测和研究中的应用(综述).............37耐碳青霉烯类药物鲍曼不动杆菌耐药机制研究摘要

6、目的本研究拟通过对本院临床分离的40株鲍曼不动杆菌耐药谱进行分析，筛选出对碳青霉烯类抗菌药物耐药的菌株，用聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction,PCR）技术检测碳青霉烯酶耐药基因，旨在阐明鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要机制，对指导临床合理使用抗菌药物，预防和控制碳青霉烯类耐药菌株的流行提供科学依据。同时采用差异蛋白组学的方法，利用SELDI-TOF-MS技术检测碳青霉烯类抗菌药物耐药和敏感菌株蛋白指纹图谱，结合聚类分析探索其用于查找碳青霉烯类抗菌药物耐药菌株亲缘性远近的临床价值。

7、方法1.收集本院2011年1月~2012年12月临床分离的鲍曼不动杆菌株。2.使用MicroScanWalkAway96全自动微生物鉴定/药敏测试系统鉴定，并通过仪器检测其对妥布霉素、复方新诺明、哌拉西林、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢曲松、阿米卡星、头孢他啶、环丙沙星、头孢噻肟、头孢吡肟、庆大霉素、加替沙星、亚胺培南、左氧氟沙星等的最低抑菌浓度（MIC），分析其耐药情况，筛选出对碳青霉烯类抗菌药物耐药的鲍曼不动杆菌。3.用聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction,PCR）技术检测碳

8、青霉烯类相关耐药基因IMP、VIM、OXA-23、OXA-24、OXA-58，然后对PCR扩增阳性产物电泳并成像，对PCR扩增阳性的产物进行测序，把测序结果与GenBank数据库进行比对。4.对所有40株鲍曼不动杆菌菌株先破坏细菌提取蛋白质，再用SELDI-TOF-MS技术及Au蛋白芯片检测细菌蛋白质指纹图谱。5.用BiomarkerWizard3.1软件进