白花前胡素类化合物抗炎活性以及分子作用机制的研究

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1、南方医科大学2010级博士学位论文白花前胡素类化合物抗炎活性以及分子作用机制的研究Anti-inflammatoryactivitiesofPraeruptorinsandtheirmolecularmechanismsofaction课题来源．o广东省新药筛选国际联合实验室(20098050900006)广州市科技重大专项(2010V1-E00531—3)学位申请人喻鹏久导师姓名吴曙光教授张嘉杰研究员专业名称药理学培养类型学术型培养层次博士研究生所在学院药学院2013年05月02日广州博士学位论文白花前胡素类化合物抗炎活性以及分子作用机制的研究博士研究生：喻鹏

2、久指导老师：吴曙光教授张嘉杰研究员摘要炎症本质是机体应对各种损伤性刺激实现自我保护的复杂防御反应，众多种类的细胞以及活性成分参与了这个过程。在炎症初期，多种炎症因子经炎性细胞释放后，对损伤因子进行稀释、杀伤以及清除，同时，炎症因子也参与了机体受损部位的组织再生，促进伤口的修复和愈合。然而，炎症反应一旦过于剧烈或持久，则会因为炎症因子本身所具有的机体破坏性而对正常组织和细胞造成损伤，诱发各种炎症疾病。因此，炎症就像机体的一把双刃剑，适当的炎症反应会帮助机体清除损伤，抵御外来感染，促进伤口愈合；而过度的炎症反应则会反过来促使多种炎症疾病的发生和发展，影响人们的健康。

3、急性肺损伤(acutelunginjury,ALl)是一种典型的过度性炎症参与的呼吸系统危重症，其定义是：心源性以外的各种肺内外致病因素引起的急性，进行性缺氧性呼吸衰竭，是肺部炎症和通透性增加的综合征。多种临床疾病均可诱发急性肺损伤，如肺炎、脓毒血症、以及胰腺炎等。研究认为，肺内过度性、失控性炎症反应是各种病因所致ALI的根本原因。目前，临床上初步使用的ALI治疗药物主要有血管舒张剂(一氧化氮、前列环素的吸入治疗)、糖皮质激素、抗凝剂人类重组体活化蛋白C(activatedproteinC，APC)、酮康唑(ketoconazole)、抗氧化剂N一乙酰半胱氨酸(

4、NAC)等。然而，这些药物的疗效在各临床试验巾还未完全得到证实，其用法用量还有着较大争摘要议，并且有着许多严重的不良反应。因此，迄今为止，治疗ALl药物的总体研究进展是令人较为失望的，临床期待更为安全有效的治疗药物。中药前胡为伞形科植物白花前胡(PeucedanumpraeruptorumDunn)的干燥根，具有散风清热、降气化痰等功效，临床常用于风热咳嗽痰多、痰热喘满、咯痰黄稠等。前期的研究显示白花前胡总提取物能够明显抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀和蛋清所致的大鼠足肿胀。同时，白花前胡提取物对卵蛋白(OVA)诱导的小鼠气道变态炎症反应也有明显的保护作用，这表明白花

5、前胡良好的体内抗炎活性。然而，这些工作的主要研究对象是白花前胡粗提取物，并没有涉及白花前胡素单体化合物，同时，其抗炎作用机制也没有进行探讨。研究显示，白花前胡的主要有效成分为白花前胡素(Praeruptorin)等香豆素类化合物，如白花前胡甲素(PmemptorinA，PA)、白花前胡乙素(PraeruptorinB，PB)、白花前胡丙素(PraeruptorinC，PC)、白花前胡丁素(PraeruptorinD，PD)以及白花前胡E素(PraemptorinE，PE)。因此，在本研究中，我们研究了白花前胡素单体化合物(包括白花前胡甲素、丙素、丁素以及E素)的

6、抗炎活性。我们利用脂多糖(LPS)建立体外巨噬细胞炎症模型，在细胞和分子水平上，从炎症相关因子NO、iNOS、TNF—a、IL一6的表达以及炎症信号通路NF．r．B、MAPK和STAT的活化来研究白花前胡素类化合物的抗炎活性以及相关作用机制。由于白花前胡在临床上的应用主要是针对肺部疾病的治疗，因此，我们建立了LPS或者HCl诱导的急性肺损伤小鼠模型，检测白花前胡素类化合物对模型小鼠肺泡灌洗液中炎性细胞浸润、蛋白渗出以及炎症细胞因孑释放的影响，同时，我们对小鼠肺组织中MPO的活力以及NF．KB通路的活化进行探讨，旨在研究和阐明白花前胡素类化合物对急性肺损伤的保护作

7、用以及相关的分子机制。研究方法和实验结果分为两大部分：一、白花前胡丙素(Pc)、白花前胡丁素(PD)以及白花前胡E素(PE)抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应1、白花前胡丙素(PC)、丁素(PD)以及E素(PE)剂量的选择：小鼠巨Il博士学位论文噬细胞株RAW264．7细胞以1×104／孑L的密度铺于96孔板后过夜贴壁，待各白花前胡素以2、4、8、16、32gg／ml剂量刺激细胞24h后。采用MTT法对细胞活力进行检测。结果显示，PC、PD以及PE在2．16gg／ml剂量范围内对细胞活力没有显著影响(差异无统计学意义)。因此本研究选取2．16gg／ml剂量范围应用

8、于后续实验。2、白花前胡